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蛋白突变后纯化不出来
蛋白
修饰位点
突变后
怎么做验证?
答:
质谱分析:使用质谱技术(如质谱成像、质谱定量和质谱测序)对野生型和
突变
型蛋白进行比较。通过分析修饰基团的变化,可以确定突变是否影响了
蛋白质
修饰。亲和纯化:使用与目标修饰特异性结合的亲和剂将修饰的蛋白质从混合样品中
纯化出来
。通过对野生型和突变型蛋白质的亲和纯化比较,可以确定突变是否影响了修饰...
一对碱基对的
突变
会不会导致
蛋白质
的无法合成?
答:
不会
。突变的位置因为不能配对,所以会形成一个凸起的环,蛋白质合成的时候跳过这个环,下面的碱基还是可以配对,继续翻译
如果基因
突变后
编码的
蛋白质
只是在含量上减少,那发生在哪里
答:
只是在含量上减少,就是说氨基酸序列未变,只是长度变了 RNA聚合酶结合位点是一段特定序列,如果它
突变
了,Rna聚合酶就无法在此结合,只能向后直至在遇到与之相同的序列时才能再结合,则转录启始点变了,但用于转录翻译
蛋白质
的序列并未改变,所以蛋白质种类不变,长度却变了,即含量变了。倘若不是在...
基因
突变
如何导致
蛋白质
结构改变?
答:
基因
突变
是DNA水平的变化,DNA三个一组对应一种氨基酸(
蛋白质
的基本组成单位)。DNA的突变只有导致编译蛋白质的开放阅读框改变(氨基酸改变,缺失或增加,甚至转录终止)才会引起蛋白质一级结构(即氨基酸序列)的改变。蛋白质的高级结构由低级结构决定,所以一级结构改变往往会引起高级结构(活性状态通常是三级或...
为什么基因
突变不
一定导致所表达的
蛋白质
结构发生改变???
答:
密码子的兼并性决定。几个不同的密码子可对应同一个mRNA,如果基因
突变
使一个密码子正好变成另一个代表同一mRNA的密码子,翻译实际上没发生实质性改变,故不影响
蛋白质
结构。
内含肽的分离
纯化
答:
内含肽在
蛋白质纯化
中的应用修饰后(位点特异性
突变
)的内含肽经诱导能够介导N端或C端单侧肽键断裂。首先将编码亲和标签、内含肽及目标蛋白的基因序列连接在一起,在合适的宿主系统中表达出一个标签-内含肽-目标蛋白的三联体,利用修饰后的内含肽构建的
蛋白纯化
载体可以将目的蛋白直接融合表达于内含肽的N端或C端,...
蛋白质突变
如何导致其稳定性提高的
答:
方法有氨基酸替换(基因工程)和
蛋白质
修饰 1、一些非活性中心的活性基团因分子构型改变被包裹在内,减少了会导致失活反应。一些极性的基团暴露,与水形成氢键,使蛋白质溶于水,不沉淀。2、形成了新的二硫键或共价键 3、引入了不同的氨基酸其侧链效果(和第一点有些重复)4、物理化学修饰如改变金属...
点
突变后蛋白质
功能不变
答:
可能有两个原因:1.因为密码子具有简并性,即大部分氨基酸都有2个或2个以上的密码子,基因虽然发生了点
突变
,但很有可能突变成编码同一氨基酸的其它密码子,翻译
出来
的
蛋白质
氨基酸序列不变。2.基因发生点突变,使得对应的密码子变成了编码另一个氨基酸的密码子(一般是性质相似的氨基酸),然而原来的...
如何检测
蛋白
在大肠杆菌中的不表达是因为mRNA的不稳定?
答:
如果PolyA酶突变了,或其他与ployA形成有关的
蛋白突变
了导致PolyA不能形成,这样导致mRNA不稳定也可能。其实我想问的重点是假如是mRNA不稳定的话,有什么方法可以检测?如果你要说不可能是mRNA不稳定照成的,那么你就设计一个实验来排除这种可能,理论还是需要实验来验证的。
为什么基因
突变不
一定导致所表达的
蛋白质
结构发生改变
答:
因为不是所有的dna都会表达,dna链上存在不转绿成rna的片段,如果基因
突变
发生在这些片段上,则不会引起
蛋白质
结构变化,因为它们不参与合成蛋白质
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