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过表达之后目的蛋白变小
原核
表达蛋白
大小偏小
答:
表达出来的蛋白比实际大小要小,这是为什么?2019年9月25日 | By Annsci0
主要原因有如下几个方面 蛋白本身被降解了
,可以存在一些不利于该蛋白稳定的蛋白酶 翻译起始位点的问题:如果一个类似于核糖体结合位点(AAGGAGG)的序列加上适当的间隔序列出现在了ATG密码子上游,降解就会有可能出现。解决的方法...
原核
表达
第一次大量表达了
目的蛋白
但第二次表达出的目的蛋白就很少了为...
答:
目的蛋白
的
表达
跟基因本身关系密切,载体,表达条件关系也很大。空载体能表达不代表你的蛋白能在该条件下表达。
蛋白
的
过表达
是什么意思
答:
就是由于某种蛋白质的表达量超过正常的水平,表达过多
。举个例子,某些蛋白必须保持低表达水平,如果表达过多,会导致疾病的发生或者生物性状的变化
基因
过表达
的原理 步骤 应用?
答:
基因
过表达
的目的一般有两种,一是获取大量的目的基因产物,二是研究目的基因产物的生物学功能。 过表达可以让我们得到大量的目的基因产物(一般是蛋白质),用于研究或生产。比如X射线晶体学研究蛋白质三维结构首先就需要过量表达得到
目的蛋白
。发酵工程制备胰岛素,taq酶等蛋白类产品都需要过表达。 为了研究某一个基因产物的...
过表达
信号通路中的
蛋白
,wb总蛋白变化量不大,其磷酸化表达增加...
答:
磷酸化
蛋白
的Western Blotting检测是信号通路研究中的经典方法。
研究
蛋白
作用为什么要从敲出和
过表达
两方面
答:
就像衡量一个容器的大小,要么里面一滴都不剩,要么撑到爆炸。你可以理解为物理学上提及到的“极端思维”,在NONE和OVER状态下微小的差异会被放大。(然而我家经常是敲除再回补,隔壁那家经常做
过表达
)
过表达
病毒载体转染细胞多久
后表达蛋白
答:
目的蛋白
与病毒的正常生长是紧密联系的,基本上在感染细胞
之后
就陆续开始有
蛋白表达
了。如果想获得好的蛋白表达量,就需要有一个好的表达系统——优化构建的基因(义翘有一万多条基因)、正常的细胞,适应发酵培养的培养基(义翘有 sf9、hi5、HEK293细胞的悬浮高效培养基)、高感染效率的病毒、合适的表达...
诱导
表达
没有
目的蛋白
产生是什么原因
答:
诱导
表达
没有
目的蛋白
产生原因无非两种 一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。
如何确认经过DNA重组克隆
表达
出的蛋白就是
目的蛋白
?
答:
双酶切、测序等等方法鉴定细胞中存在目的基因。然后在蛋白水平,所
表达
的
目的蛋白
如果带有荧光蛋白的话往往可以通过显微镜观察出来,如果带有标签蛋白的话(如His标签),一般也可以过柱子纯化出来。如果都没有的话,可以通过WB进行鉴定,或者通过蛋白电泳观察条带对应的分子量大小是否与目的蛋白大小相同。
蛋白质
的提取中如何确定
目的蛋白
?
答:
如果蛋白有纯化标签并且是
过表达
的话就比较容易判断,一般纯化过程中通过SDS电泳不同组分确定
目的蛋白
。如果没有纯化标签,一般是通过SDS电泳或者双向电泳和蛋白活性实验(如果蛋白有生物活性,比如酶),或者通过western blot来确定目的蛋白。如果再想精确的话,就是N端测序或者做肽谱。
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