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过表达之后目的蛋白变小
做
蛋白
的原核
表达
时为什么总是不稳定,明明上次已经有表达了,现在又老做...
答:
这个很正常,我也碰到过,有时候是找不出原因的,只能再转化,设置重新开始,筛选稳定的了。
诱导
表达
没有
目的蛋白
产生是什么原因
答:
诱导
表达
没有
目的蛋白
产生原因无非两种 一是诱导条件不适合目的蛋白的表达,可通过改变培养基,温度,诱导剂等条件重新摸索出合适的诱导条件。二是目的蛋白的菌种有问题,可通过涂板挑选单克隆菌落重新培养,或者质粒重新转化表达菌株等方法优化菌种。
生物学名词解释
答:
58、 Klenow片段:用枯草杆菌
蛋白
酶可将DNA聚合酶I裂解为大小两个片段,大片段的分子量为76kD,这个片段也称为 Klenow片段。59、 入 噬菌体:是感染细菌的病毒,其基因组是线性双链DNA分子,当其感染宿主细胞并将基因整合到细胞
后
,基因组DNA
变成
环状,用于分子克隆中的载体。60、 基因文库:采用限制酶将基因组DNA切成...
研究
蛋白
作用为什么要从敲出和
过表达
两方面
答:
就像衡量一个容器的大小,要么里面一滴都不剩,要么撑到爆炸。你可以理解为物理学上提及到的“极端思维”,在NONE和OVER状态下微小的差异会被放大。(然而我家经常是敲除再回补,隔壁那家经常做
过表达
)
如何确认经过DNA重组克隆
表达
出的蛋白就是
目的蛋白
?
答:
以我个人的实验经历来说:首先,我会先在基因水平鉴定,先提DNA或质粒,通过PCR、双酶切、测序等等方法鉴定细胞中存在目的基因。然后在蛋白水平,所
表达
的
目的蛋白
如果带有荧光蛋白的话往往可以通过显微镜观察出来,如果带有标签蛋白的话(如His标签),一般也可以过柱子纯化出来。如果都没有的话,可以通过WB...
蛋白
纯化出来
后
发现实际值比理论值小10KD的原因
答:
这个是发酵
表达后
分子量就偏小还是纯化后分子量偏小?如果是纯化后,有可能是纯化中找错了
目标
条带,也有可能是SDS-PAGE检测分子量偏小,那不能说明真的是偏小的,SDS-PAGE是表观分子量,要确认需要质谱或者分子排阻确认。可以先基因测序确认下构建表达是否正确,如果
蛋白质
有亲和标签,可以检测WB确认...
之前一直做诱导
表达
都有很高的酶活,可是最近做的能从
蛋白
胶上能看到
答:
非变性凝胶里面没加变性剂,一般是SDS。非变性胶跑出来的
蛋白
能保持其活性一般用做功能试验,如EMSA。由于没有变性剂的原因非变性胶电泳时除了与蛋白分子量有关也会受都电荷的影响,因此对蛋白等电点的确定和缓冲液的酸碱性有注意,有时需要倒转电泳时的正负极。从跑的胶来看,变性胶会比较好看,带...
用基因工程方法大量
表达
内在膜
蛋白
为什么会存在着很大的困难_百度知 ...
答:
基因工程的方法
表达蛋白质
,并且要大量表达,那么高活性的表达受体是必须的,而且
目的
基因的活性和其他方面要求自然也高了。然后是培养,只有把受体培养好了,才能大量表达你所需要的内在膜蛋白。接下来是表达。内在膜蛋白是一种蛋白质,蛋白质的合成在核糖体,其后经过内质网,高尔基体各种加工。最后一步是...
蛋白表达之后
又不表达了是什么原因
答:
蛋白表达之后
又不表达了原因很多 可能是保藏菌种出了问题,带有质粒的重组菌甘油浓度超过一定程度会影响质粒稳定性。可以重新做质粒转化提高表达量 另外就是表达的条件控制了,发酵过程中可能会因为时间,温度等等条件变化影响到蛋白的表达
原核
表达
,为什么空载表达的很好,
目的蛋白
没有表达,可能的原因有什么...
答:
目的蛋白
的
表达
跟基因本身关系密切,载体,表达条件关系也很大。空载体能表达不代表你的蛋白能在该条件下表达。
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