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镍柱纯化蛋白后跑胶无目的蛋白
蛋白
经
镍柱纯化后
出现两条带并且非
目的
条带也可跟镍柱结合,求解答
答:
感觉是二聚体,有时候二聚体跑SDS还是两条的
镍柱
过了以后一般
蛋白
就已经很纯了,杂蛋白已经很少了 查查文献看这个蛋白有没有二聚体,反正一般也不影响鉴定的
镍柱纯化后
哪部分进行透析
答:
镍柱纯化后
进行透析的部分是经洗脱后获得的
目标蛋白
样品。透析是一种分离和纯化生物大分子的方法,其基本原理是利用不同大小和形状的孔道将目标分子与溶液中其他组分分离开来。对于镍柱纯化后的蛋白复合物,需要进行进一步的纯化和结构研究,可以使用各种透析技术,如凝胶透析、尿素透析、离子交换透析等。
镍柱纯化后
为什么
目的蛋白
条带下移了
答:
镍柱纯化后目的蛋白
条带下移比较有可能的就是蛋白降解了 首先需要确认纯化前的目的蛋白位置是否正确,如果纯化前纯化后目的蛋白的位置都一样,都比理论值下移,那么这个就和
镍柱纯化没有
什么关系。如果是纯化后目的蛋白的位置比纯化前下移,那么降解的可能性就比较大了。建议保持低温或者加入蛋白酶抑制剂再...
镍柱纯化蛋白
,为什么把所有流出液电泳,都
没有
看到蛋白条带啊?加入前...
答:
电泳检查你的流穿液,对比上样前的样品,确信
蛋白
石结合到柱上 你his-tag的包涵体蛋白,用尿素洗脱,其pH值是多少?需要用低pH;如果pH不够,极可能你的蛋白还在柱上。此外,你有没尝试过柱上复性,以避免用尿素洗脱?
蛋白纯化
过
镍柱以后
为什么会沉淀啊??
答:
蛋白浓度过高的时候,会发生聚集而沉淀。有些不易溶蛋白随着
镍柱
的富集作用就会沉淀。由于不知道你实验目的,简单认为你要
纯化
表达的蛋白,解决方法:1. 换更强亲水肽段载体pet50(从酶切链接开始做),但是这样会在表达出来蛋白中增加非
目的蛋白
成分 2. 不要用最佳浓度咪唑洗脱,用稍差一些的,这样洗脱...
为什么用带HIS标签的
镍柱纯化
试剂盒
纯化蛋白后
包ELISA可以避免大肠杆...
答:
因为,纯化过程包括对大肠杆菌的裂解和对
目标蛋白
的纯化,经
纯化后
,大部分的杂质(杂蛋白、糖和核酸)都去除了,对ELISA的干扰小。如果不纯化,大肠杆菌本身是有众多生物分子的,这都是潜在的干扰性抗原。
镍柱纯化蛋白
反复使用
答:
请问您问的是
镍柱纯化蛋白
能反复使用吧。能反复使用。因为过柱后镍柱即可再次使用,但为防止蛋白的交叉污染,每根柱子最好只用于同种蛋白的纯化,所以镍柱纯化蛋白能反复使用。
蛋白纯化
方法有很多,像亲和层析,蛋白沉淀,缓冲液更换,离子交换色谱,疏水作用,排阻层析,电泳等。
蛋白
过
镍柱纯化
的原理和步骤是什么
答:
步骤是:过柱子前可以选择Ni柱重生,也就是往柱子里倒氯化镍,一个柱长体积就行了,然后平衡柱子,拿你自己的buffer,给蛋白提供最适的环境,我一般平衡4个柱长,
然后蛋白
上样,你可以让他自己挂,这样挂柱子的效果好一些,如果流速太慢,可以加个恒流泵,但是一定不能太快,太快挂柱效果差,当然你也可以选择循环挂柱,就...
镍柱纯化
时,镍离子被洗脱下来掉到
蛋白
溶液里对蛋白有影响吗?透析时只有...
答:
Ni离子是重金属,进入
蛋白
中肯定是有影响的,如果这个蛋白是用于人体或者动植物的肯定是不行的。Ni柱重新挂Ni确实是必须要脱Ni的,但一般是先用咪唑把蛋白全部洗下来后才脱Ni的,所以一般不太可能进入蛋白溶液中,如果进入了你可以重新用另一根柱子(这个柱子得保证结合你的蛋白),将蛋白溶液穿过这个...
镍柱纯化蛋白
为什么加pmsf和dtt
答:
需要每1小时补加一些新鲜的PMSF。加DTT是因为DTT是一种还原剂,可以打开
蛋白质
的二硫键,阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。避免His-tag被包裹在蛋白结构的内部导致
目标蛋白
不能结合
镍柱
。需注意DTT会还原镍柱上的镍离子,可能会造成镍离子的脱落而影响柱效。
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