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原核表达载体和真核表达载体
表达载体和
克隆载体一样吗?有什么区别?实验室常用有哪些?
答:
按功能分成:(1)克隆载体: 都有一个松弛的复制子,能带动外源基因,在宿主细胞中复制扩增。它是用来克隆和扩增DNA片段(基因)的载体。(2)
表达载体
:具有克隆载体的基本元件(ori,Ampr,Mcs等)还具有转录/翻译所必需的DNA顺序的载体。3各自特点 克隆载体:大多是高拷贝的载体,一般是
原核
细菌,将...
核糖体结合位点与SD序列有什么区别?
答:
SD序列仅存在于原核生物吗 启动子 启动子是DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并起始RNA合成的序列,它是基因表达不可缺少的重要调控序列。没有启动子,基因就不能转录。由于细菌RNA聚合酶不能识别
真核
基因的启动子,因此
原核表达载体
所用的启动子必须是原核启动子。 原核启动子是由两段彼此分开且又高度...
DNA,纯化,
表达
,连接.
答:
原核表达
一般程序如下: 获得目的基因-准备
表达载体
-将目的基因插入表达载体中(测序验证)-转化表达宿主菌-诱导靶蛋白的表达-表达蛋白的分析-扩增、纯化、进一步检测
真核表达
异源蛋白质在细菌中表达是目前使用的主要的蛋白生产系统。大肠杆菌一直是最经济的系统之一。然而为了生产需要特异修饰、胞外分泌或有特异折叠需要的蛋...
将外源基因导入
原核
细胞或
真核
细胞分别有哪些方法?
答:
此法靶向性好,但受体介导的内吞小泡会被转运到溶酶体,易被溶酶体降解而造成目的基因
表达
时间短暂,表达效率低下。利用氯哇抑制溶酶体酶或腺病毒与内吞小泡相融合而将其破坏释放出外源DNA,可提高转化效率。3 生物学方法 主要通过构建病毒
载体
来完成。3.1 逆转录病毒(retrovirus,Rv):构建简单,装载...
...已知序列的小分子抗菌肽,论述如何采用生物工程的技术进行
表达
...
答:
5、选择适合的表达系统和适合的
载体
。可采用大肠杆菌
原核表达
系统,将目的基因从与T载体的重组质粒上进行双酶切后连接到适合的载体(如pET28a)上,转化入克隆菌(如TG1)并大量克隆,用酶切和PCR鉴定重组结果。也可采用
真核表达
系统,若改小分子抗菌肽是真核表达的蛋白,易糖基化、易翻译后修饰,则...
基因
表达载体
的构建需要哪些工具酶
答:
在构建基因
表达载体
时要用到的工具酶有限制酶和DNA连接酶。基因表达载体的构建(即目的基因与运载体结合)是实施基因工程的第二步,也是基因工程的核心。其构建目的是使目的基因能在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代,同时,使目的基因能够表达和发挥作用。过程:首先要用一定的限制酶切割质粒,使...
克隆
载体与表达载体
的区别
答:
一、原理不同 1、克隆载体:采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体,在载体上插入合适大小的 外源DNA片段,并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中,并在宿主细胞中大量繁殖。2、
表达载体
:在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)...
木霉
表达
系统
答:
但是,木霉的表达系统可以克服在
原核表达
系统中无法进行特定翻译后修饰的缺陷,而且比酿酒酵母具有更高的分泌外源蛋白的能力,所以成为生产具有生物活性的
真核
生物蛋白的重要途径。目前在木霉中特别是T.reesei中已发展多种分子系统,采用不同的策略用于同源和异源蛋白的生产,为了提高蛋白产量,使用强表达和有效分泌的纤维素...
密码子
与
外源基因
表达
答:
由于
原核
生物
和真核
生物基因组中密码子的使用频率具有不同程度的差异性,因此,外源基因尤其是哺乳动物基因在大肠杆菌中高效翻译的一个重要因素是密码子的正确选择。一般而言,有两种策略可以使外源基因上的密码子在大肠杆菌细胞中获得最佳
表达
:A. 外源基因全合成 B. 同步表达相关tRNA编码基因 2.
载体
的...
原核
生物启动子的结构特点及功能
答:
启动子是一段位于结构基因5'端上游区的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性。因为基因的特异性转录取决于酶与启动子能否有效地形成二元复合物,故RNA聚合酶如何有效地找到启动子并与之相结合是转录起始过程中首先要解决的问题。有实验表明,对许多启动子来说,RNA...
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