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得到大量原核表达的X蛋白
如何
得到
基因的
原核表达蛋白
,并通过免疫动物得到特异性抗体
答:
要
得到
基因的
原核表达蛋白
,先要考虑
表达的
载体,pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统,已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。一般的pET载体是先在不含DE3片段的菌株中进行克隆筛选,之后再把阳性克隆转化进入表达菌株,如BL21 DE3中,通过IPTG诱导进 行表达。通过扩大培养的体积
获得
...
求助:
原核表达
目的
蛋白
胞内发生降解
答:
应该是
原核表达
宿主菌比较准确 原核表达宿主菌之前可以
表达蛋白
,放一段时间不表达蛋白原因很多 首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒载体,表达条件等等 原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果。能抑制多长时间你需要自己检测。不同细胞、不同siRNA、不同转染...
如何确定一个
蛋白
选用真核表达还是
原核表达
、
答:
一般真核生物来源的
蛋白质
用真核表达,原核生物来源的用
原核表达
,因为真核生物和原核生物有密码子偏好,比如说同一个氨基酸可以由A和B两种密码子编码,真核生物偏好A,含有A的序列在真核中表达量较高,否则,含有B的序列表达量很低。
蛋白的表达
与纯化
答:
2 构建表达载体:根据你
获得的
基因本身的特性确定原核或者真核载体中表达,这一步的主要问题就是构建带有目的基因的质粒,导入表达系统中。一般
原核表达
时间短,成本低,表达量大,常优先考虑;但是有些基因在E coli中就是表达不出,可能是密码子优化等出现问题,也或者是由于想纯化
得到
更好的活性
蛋白
的...
这是一道考研题:现需要
得到
某个基因
的蛋白表达
产物,用来制备该基因的多...
答:
下面是通过
原核表达
系统
得到
基因
表达的
产物以及制备多克隆抗体的一种方法:1.得到目的基因:设计引物(引物上带有酶切位点)→进行PCR,胶回收,酶切,再胶回收,得到带有粘性末端的目的基因→将目的片段连接到具有相同粘性末端的PET载体上 2.得到目的
蛋白
:将连接好的带有目的片段的载体转入到DH5α菌系...
原核表达
载体和真核表达载体的区别
答:
2、PCR产物双酶切后回收,在T4DNA连接酶作用下连接入载体。真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体,具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP
蛋白表达
基因。二、表达实现方式不同:
原核表达
载体测序验证目的基因的插入方向及阅读框架均正确,进入下步操作。否则应筛选更多克隆,重复亚克隆或亚克隆至不同酶...
原核
生物的
表达
系统和真核的有什么不同
答:
真核生物与
原核
生物的主要区别是:1、真核生物具有由染色体、核仁、核液、双层核膜等构成的细胞核;原核生物无核膜、核仁,故无真正的细胞核,仅有由核酸集中组成的拟核,也称核区(生物学名词)。2、真核生物的转录大多在细胞核中进行,也可以在半自助细胞器(如叶绿体和线粒体)中进行,
蛋白质
的...
用基因工程方法
大量表达
内在膜
蛋白
为什么会存在着很大的困难
答:
基因工程的方法
表达蛋白质
,并且要
大量表达
,那么高活性的表达受体是必须的,而且目的基因的活性和其他方面要求自然也高了。然后是培养,只有把受体培养好了,才能大量表达你所需要的内在膜蛋白。接下来是表达。内在膜蛋白是一种蛋白质,蛋白质的合成在核糖体,其后经过内质网,高尔基体各种加工。最后一步是...
为什么要让真核生物的基因在
原核
生物中
表达
并纯化
蛋白
呢?
答:
实际上真核生物的蛋白也可以用真核细胞
蛋白表达
系统来实现,而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化
的蛋白
性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。
关于
原核表达
问题,新手求助!
答:
你可以分别跑全菌体、上清,细胞裂解后再离心
得到的
上清也跑电泳。全菌体加上样缓冲液煮沸就可以了
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