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构建载体测序检测
自己设计的基因导入到
载体
后,扩增完成,用PCR
检测
和双酶切检测成功,但是...
答:
你再比下
测序
结果的互补序列、反向序列、反向互补序列看看,是否是忘了这么比较了 如果再不是的话那就说明你的这段序列不是保守序列
小弟正在
构建
表达
载体
,
测序
后发现,我的目基因跟终止子之间夹杂了140bp...
答:
当然影响了,目的基因完了会接着翻译夹杂的序列的,一直到终止子为止。
构建
的原核表达
载体
,
测序
也正确,为什么有的就不表达目的蛋白?
答:
先
测序
看看序列是不是三的倍数,保证是连接到
载体
上,并且载体也是转入表达菌的,不行的话,通常做法是调节诱导剂浓度,诱导时间,不行就换载体,如BL21换ROSSETTA等,再不行就换载体。其实我也遇到,有个蛋白始终没有表达,没办法放弃了。
简述重组
载体构建
的原理和步骤
答:
2.PCR扩增片段 3.扩增后的片段与pMD18/19T克隆
载体
连接,通过蓝白斑筛选,提质粒并酶切鉴定;将正确连接的克隆载体重组质粒酶切,回收目的片段 4.目的片段与表达载体连接 5.转化到DH5a等克隆菌株,通过抗生素筛选,鉴定表达重组质粒。6.
测序检测
7.正确的表达重组质粒再转到表达菌株 8.表达 ...
shrna
构建载体
后
测序
突变了一个碱基还能用吗
答:
我想,问题可能出现在以下几个环节:1.PCR是否成功?如果跑胶后目的片段的条带位置正确,可基本确定成功。2.胶回收是否成功?胶回收后是否跑胶查看浓度?3.SmaI酶切体系是否正确?通常酶量不能超过体系1/10,否则甘油会妨碍酶切的进行。4.通
为什么要
构建
表达
载体
? 这两点是主要原因
答:
2、
测序
需要。你想转表达,你首先得确定你扩增的目的片段是不是你要的,不要以为你设计了个特异性引物,然后跟你mark的长度就可以确定了,这也只是推测,在科学上不严谨。扩增出的基因片段保险起见或者经费允许,要拿去测序,而一般送测的序列都是
构建
到
载体
上的序列,克隆载体上一般也都带有测序引物,...
这样的
测序
结果,
载体
是
构建
成功了吗?
答:
如果蓝色部分是你的目的基因,然后两边
载体
序列也对,那这个载体就没问题了。
测序
结果是测出了
载体
上插入位点两端的序列和目的基因中间的一段,是...
答:
按照你的结果来看应该使用的
测序
引物是
载体
上的通用引物,这样的引物位置一般在载体的多克隆微点外侧,测序其实就是可
检测
的PCR,只能测出来通用引物之间的位置,所以,你的测序结果就有插入微点两端的一小段序列和你的目的片段,如果目的片段比较长的话就需要多次测序,因为每次测序的有效可信片段在600-800...
构建
t
载体
后菌液
测序
结果说结果重叠是什么意思
答:
就是
测序
有套峰,很乱,峰是两个或以上的重叠
载体构建
中,引物设计序列与克隆
测序
不一致,向您请教!
答:
第一个问题,只有一个碱基缺失,克隆
测序
和引物合成都没有问题;第二个问题:酶切连接入
载体
后,克隆过程就完成了;第三个问题:如果你说的是转化过程的话,应该是先做好连接,再做转化。
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