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真核蛋白表达及纯化步骤
真核表达
分泌型
蛋白
, 有信号肽序列的质粒转染293T细胞,western鉴定...
答:
上清收了做ELISA 细胞直接裂解提
蛋白
做WB
真核
过
表达
质粒,原核过表达质粒的区别~急求~~
答:
一、指代不同 1、
真核
过表达质粒:真核细胞表达载体之一为pEGFP-N1载体,具有对方面的优点。pEGFP-N1载体上携带有EGFP
蛋白表达
基因。2、原核过表达质粒:能携带插入的外源核酸序列进入原核细胞中进行表达的载体。二、特性不同 1、真核过表达质粒:该质粒具有很强的复制能力,可以满足随宿主细胞分裂时...
DNA
与蛋白质
相互作用的研究方法有哪些
答:
离心收集与固定化的融合蛋白(即与磁珠相互结合的融合蛋白)中的诱饵蛋白相结合的目的蛋白,经过煮沸处理使目的
蛋白与
诱饵蛋白相脱离从而从固相支持物(例如磁珠)上脱离下来,收集样品,再与目标蛋白的抗体作Western blotting分析,以检测出与诱饵蛋白的目标的目标蛋白。染色质免疫共沉淀技术(ChIP)
真核
生物的基因组DNA以染色...
目的
蛋白
的重组质粒已经构建好了,
真核表达
要多长时间
答:
HEK293细胞
表达
系统,瞬时转染的话 3天左右可以初步检测表达效果,可以14天内优化表达效果。关于这个系统,有任何疑问可以咨询我 4008909989
请论述酶蛋白基因克隆,
表达
,
蛋白纯化
时须考虑的因素(救救孩子吧)_百度...
答:
首先要根据需要决定是表达有活性的酶 ,还是无活性的
蛋白
也可以,或者只表达部分肽段(比如做抗体,或某些功能研究)。如果需要有活性,那就要了解酶的相关信息,比如需不需要辅因子之类,折叠有没有问题等等。这决定了表达方式的选择,
真核
还是原核,宿主和载体的选择等等。最简单还是原
核表达
,直接用cDNA...
真核
生物mRNA加工主要包括哪些
步骤
答:
三信使RNA:
真核
生物编码
蛋白质
的基因以单个基因为转录单位,但有内含子,需切除。信使RNA的原初转录产物是分子量很大的前体,在核内加工时形成大小不等的中间物,称为核内不均一RNA(hnRNA)。其加工
过程
包括: 1.5’端加帽子:在转录的早期或转录终止前已经形成。首先从5’端脱去一个磷酸,再与...
相分离重点
答:
带电氨基酸也能够影响相分离的形成,成对的、带相反电荷的蛋白能够以复合凝聚的形式形成沉淀。推测
蛋白质
中的IDR以分析其发生相分离的能力 另外需要注意的是,蛋白质的翻译后修饰(PTM)对于相分离是非常重要的,在细菌
表达纯化
出来的蛋白一般翻译后修饰非常少, 在
真核
细胞纯化的蛋白一般具有较好的翻译后...
基因
表达
合成
蛋白质
需要内质网高尔基体么
答:
真核
生物翻译起始的特点:1.真核起始甲硫氨酸不需甲酰化。2.真核mRNA没有S-D序列,但5'端帽子结构与其在
核蛋白
体就位相关。帽结合蛋白(CBP)可与mRNA帽子结合,促进mRNA与小亚基结合。3.肽链的延长 :延长阶段为不断循环进行的
过程
,也称核蛋白体循环。分为进位、成肽和转位三个
步骤
。三、多肽链...
如何提高
蛋白质
活性
答:
避免过度搅拌。第二,要尽量提高其纯度。第三,注意有些
蛋白质
需要激活剂,如金属离子等。网站:http://www.51protocol.com/ ,其实你可以去附近的高校图书馆,或生物系的学生借生物化学实验手册,或蛋白质分离手册之类的书看更合适些,这里的学问大着呢,另外还有不断摸索最佳的
纯化
条件。
目的
蛋白
有跨膜区,在原核中怎样克隆
表达
答:
实际上
真核
生物的蛋白也可以用真核细胞
蛋白表达
系统来实现,而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望
表达和纯化
的蛋白性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用原
核表达
系统就很合适了。
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