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纯化后蛋白还有标签吗
【学习笔记】
蛋白纯化
之亲和层析
答:
FLAG-Tag亲和层析: 适用于抗体检测,但成本较高,需注意
标签
切除,追求的是精准与效率的平衡。Strep-Tag亲和层析: 以高亲和力见长,对金属离子
蛋白
尤其适用,操作条件相对宽泛。肝素亲和层析: 适用于核酸结合蛋白的
纯化
,其离子交换作用广泛,对多种蛋白都具有吸引力。稳定剂的守护者: 提升蛋白稳定性的...
pull-down 和co-IP的区别是什么
答:
区别二:pull-down作用:pull-down,胞外
纯化蛋白后
证明两个蛋白之间有相互作用,这个相互作用必然是直接相互作用。区别三:Co-IP,in vivo作用:Co-IP,in vivo,可以证明两个蛋白在体内至少会形成复合物,但不能确定是否是直接相互作用的,这就必须借助于pull-down了,两者缺一不可。区别四:Co-IP...
大肠杆菌中表达t7-rna聚合酶吗
答:
3,重复(3)的步骤进行SDS-PAGE分析;ml 卡那霉素存储液,若转化DH5α。当需要表达
蛋白
时。750μl20mMTris-HCl,Western 印迹;ml乙酰BSA(根据需要补足水到30μl2)37℃温浴2-4h3)取3μl样品进行电泳检测消化反应进行的程度4)消化完全后,克隆进T-载体,需进行包涵体
纯化
、定量分析确定目的蛋白⑥放大...
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