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做原核表达的目的
为什么在
做原核表达
SDS-PAGE时对照的还要做个加诱导剂的呢,那诱导剂...
答:
因为你做的并不是纯化的蛋白电泳,而是菌体的总蛋白,如果不作对照的话,就不能说明哪个条带是你
的目的
基因的特异
表达
。如果
做目的
基因不加诱导剂的对照的话,可以看出目的基因在不诱导下的本底表达水平。也可以看出诱导剂的作用。我们实验室就是那么做的,有时候还会加空菌(宿主菌)的对照。
如何选择无细胞蛋白
表达
系统
答:
3)体外无细胞蛋白
表达
系统(又可以分为
原核的
和真核的),天根,promega都有相应的试剂盒可选。原核的主要是指大肠杆菌表达系统了,优点就四个字,简单快捷,缺点也是蛮明显的:容易形成包涵体;折叠性差;很少的翻译后修饰;表达出来的蛋白可能没有活性。所以如果蛋白主要是用来做活性实验,建议还是用真...
基因
原核表达的
详细过程
答:
重组表达质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解上清有分子质量为39.5kD的融合蛋白。【结论】 成功构建了人resistin基因
原核表达
载体,且构建的载体能表达出含
目的
蛋白的融合蛋白,为下一步研究打...
实验专栏 | 大肠杆菌
原核表达的
整体思路
答:
在现代生物学研究中,蛋白质的结构与功能研究占据核心地位,高纯度、活性
目的
蛋白的获得是关键。大肠杆菌原核表达凭借其操作简便、表达量高和成本效益,成为广泛采用的蛋白表达手段。本文将简要介绍大肠杆菌
原核表达的
整体步骤。首先,确定表达策略:获取目的基因是第一步,可通过NCBI获取序列并分析其特性和来源...
真核
原核表达
系统的优缺点?
答:
在各种表达系统中,最早被采用进行研究的是
原核表达
系统,这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体(一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌),通过IPTG诱导并最终纯化获得所需
的目的
蛋白。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物,而且所需的成本相对比较低廉。但与...
原核
细胞和真核细胞基因
表达
过程的比较
答:
原核
基因
表达
调控与真核存在很多共同之处.但因
原核
生物没有细胞核,亚细胞结构及其基因组结构要比真核简单得多.1.原核基因转录调节特点 ⑴σ因子识别特异启动序列,不同的σ因子决定特异基因的转录激活,决定mRNA,rRNA和tRNA基因的转录.⑵除个别基因外,原核生物绝大多数基因按功能相关性成簇的串联、密集于...
真核表达系统与
原核表达
系统的异同
答:
原核
生物和真核生物基因表达调控的共同点:a 结构基因均有调控序列;b 表达过程都具有复杂性,表现为多环节;c
表达的
时空性,表现为不同发育阶段和不同组织器官上的表达的复杂性。真核生物基因表达调控与原核生物的区别:a 调控过程复杂程度不同。真核生物基因表达调控过程比原核生物基因表达调控过程...
真核过
表达
质粒,
原核
过表达质粒的区别~急求~~
答:
用甲醛固定后会持续发出荧光,但在还原环境下荧光会很快熄灭。2、原核过表达质粒:以含
目的
基因的克隆质粒为模板,按基因序列设计一对引物(在上游和下游引物分别引入不同的酶切位点),PCR循环获得所需基因片段。参考资料来源:百度百科-
原核表达
载体 参考资料来源:百度百科-真核细胞表达载体 ...
真核表达系统与
原核表达
系统的异同?
答:
一、真核表达系统与
原核表达
系统的共同点 1、真核与原核细胞结构基因均有调控序列。2、表达过程都具有复杂性,表现为多环节。3、
表达的
时空性,表现为不同发育阶段和不同组织器官上的表达的复杂性。二、真核表达系统与原核表达系统的的区别 1、细胞结构存在着差异 原核细胞细胞器只有核糖体,细胞核没...
关于
原核表达
问题
答:
手掌放在瓶底下从上面看不清手指了,就OK了,但关键还是要看你
的目的
蛋白浓度,条带会变成很明显的一大团。诱导的起始浓度是要测定的,一般都是1.0,诱导时间是取样以后根据诱导蛋白
表达
情况测定的,没有统一安排。一般还要做IPTG浓度梯度,温度梯度寻找最佳条件。
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