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原核表达对蛋白的修饰
蛋白表达--
原核蛋白表达
答:
尽管大肠杆菌系统以其简单、经济和快速的特点闻名,但并非所有
蛋白
都得其所哉。某些需要精细
修饰
或特定环境的蛋白,可能需要转战真
核表达
系统。在质粒载体的设计上,复制起点、启动子、目标基因等元素必不可少,同时还要考虑调控序列和SD序列的精准匹配。为了突破大肠杆菌的局限,真核基因的转化需借助cDNA和...
简述
原核
和真
核表达
体系各自的优点、缺点。
答:
【答案】:
原核表达
体系的优点是培养方法简单、迅速、经济而又适合大规模生产;不足之处是只能表达cDNA,不能表达真核基因组DNA
表达的蛋白质
不能形成适当的折叠或进行糖基化
修饰
;表达的蛋白质常形成不溶性的包涵体。真核表达体系的优点是可表达基因组DNA,表达的蛋白质可被适当修饰,因此表达产物直接就有...
原核表达
详细步骤
答:
原核与真核间的抉择:原核表达以其遗传清晰、成本效益高和蛋白质稳定性强而闻名,但缺乏后翻译修饰
。相比之下,真核表达能提供蛋白修饰的机会,但复杂性和成本增加。在构建重组体时,引物设计是关键,需确保读码准确,同时加入酶切位点,遵循引物设计的严格规则。诱导表达的调音师:原核表达可通过诱导进行...
原核表达
时跑完电泳,条带应该是多大,是和自己的目的基因
蛋白的
分子量一...
答:
原核表达的蛋白是没有修饰作用的
,一般而言电泳表观分子量应该与蛋白分子量+标签的大小一致。但有时候会有一定的迁移,比如用pet28a表达的蛋白进行电泳时表观分子量会比蛋白分子量+标签大5kD左右。不过通过对比未诱导的阴性对照能很清楚地看出来自己表达的蛋白。
原核表达蛋白
与原材料提取蛋白相比有何优缺点
答:
缺点:如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控,有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用,过量表达可能导致非生理反应,目的蛋白常以包涵体形式表达,导致产物纯化困难;而且
原核表达
系统翻译后加工
修饰
体系不完善,表达产物的生物活性较低。
蛋白表达
系统分类
原核蛋白
表达系统既是最常用的...
原核
生物中
表达
真核
蛋白
应该注意
什么
问题
答:
因为
原核
生物缺乏翻译后
的修饰
,所以
表达
的真核
蛋白
和真核中表达有所差异,可能没有生物学活性等,但是要是做免疫原应该没问题;基因需为cDNA,不能含有内含子,原核细胞不能对mRNA进行剪切;要分析DNA序列信息,分析其密码子,由于
原核
与真核生物的密码子偏好性不同,所以有时可能会出现稀有密码子而...
利用大肠杆菌和酵母菌生产重组人胰岛素的区别是
什么
?
答:
1、表达不同|:大肠杆菌是
原核表达
,酵母菌是真核表达。2、对目的
修饰
不同:原核系统不会对目的蛋白进行额外修饰,真核系统会对目的蛋白进行适当修饰,比如糖基化等等。2、接近人体蛋白程度不同:真核系统
表达的蛋白
通常更接近人体蛋白。
蛋白原核表达
答:
该感受提缺少Lon蛋白酶和OmpT蛋白酶,从而减少对重组
蛋白的
降解,补充大肠杆菌缺乏4种稀有密码子( AGA、AUA、CCC、CUA)对应 tRNA (argU、ileY、proL、leuW)提高外源基因,尤其是富含AT-或 GC-的真核基因在
原核
系统中的
表达
水平。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区...
为什么有些在
原核
细胞中
表达的
真核
蛋白
没有生物活性 求稍微详细一点的答...
答:
因为在原核细胞中表达真核蛋白,
蛋白质
在表达完缺少部分
修饰
,如:糖基化,进一步折叠等等,所以没有像真核细胞表达出来的蛋白那样有活性,再者,
原核表达
很有可能会过表达,蛋白之间会形成包涵体,也会导致蛋白失活,这样可能得变形复性后才能从新有活性。
相比真核表达系统,
原核表达
系统的劣势体现在
答:
一、
原核表达
体系 1、E.coli是当前采用最多的原核表达体系,其优点是培养方法简单、迅速、经济而又适合大规模生产工艺,其缺点为:由于缺乏转录后加工机制只能表达克隆cDNA,不宜表达真核基因组的DNA;由于缺乏适当的翻译后加工机制,表达产物无
修饰
过程,分子构型可发生改变。2、
表达的蛋白质
常常形成不溶性...
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