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纯化后蛋白还有标签吗
如何鉴定
纯化后
的
蛋白
又没有活性
答:
蛋白纯化后
是否存在活性的鉴定:1.凝胶电泳:一般可以用非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳可以检测变性和天然状态的
蛋白质
,或用非还原的聚丙烯酰胺电泳检测有二硫键的蛋白复性后二硫键的配对情况。2.光谱学方法:可以用紫外差光谱、荧光光谱、圆二色性光谱(CD)等,利用两种状态下的光谱学特征进行复性情况的检测,但...
带有his tag的
蛋白
跑胶的位置到底是多大
答:
是这样的,his
标签蛋白
就是:六个组氨酸。一般存在于重组蛋白前面或后面,便于
纯化
该重组蛋白,组氨酸可以特异性的结合镍离子,带有组氨酸标签的重组蛋白可以被镍柱吸附,从而达到纯化的目的。也就是在表达载体上面,特别加六个组氨酸的碱基序列,就可以了,一般商业载体上面都有。该清楚了吧。
原核表达产物
纯化后有
一条非目的
蛋白
条带,怎么办
答:
如果
有
抗体,做个western blot判断下,是杂带还是降解片段;如果是杂带,优先考虑优化你使用的
纯化
方案,如Ni柱,考虑延长washing buffer的时间和提高咪唑浓度,使用分辨率更好的填料;还去不掉,考虑用2步或3步纯化,比如用离子交换、凝胶过滤。个人见解,仅供参考,祝一切愉快!
用Ni亲和层析柱
纯化
His
标签
融合
蛋白
时需要注意哪些事项
答:
使用Ni柱
纯化
带有His
标签
的融合
蛋白
,是我们大家再熟悉不过的实验操作了.我们对整个操作的流程及注意事项,很可能是师从兄师姐那里获得的.这 些经验都是大家智慧的结晶.同时,这也有一定的不足之处,那就是我们学习到的是局部,
还有
一些我们不常用或者基本不会接触到的面儿,那些知识我们应该从哪 里掌握呢?
博格隆GST
标签蛋白纯化
解析
答:
博格隆提供了GST Bestarose 4FF和4B两种填料,满足不同GST标签蛋白的纯化需求。纯化过程涉及两步或三步策略,推荐使用特定的平衡液和洗脱液,如添加还原剂可能影响收率。尽管GST
标签蛋白纯化
技术有诸多优势,如高纯度和便捷性,但其大分子量可能影响蛋白功能,且限于可溶性蛋白。因此,根据蛋白特性选择合适的...
基因带六个his
标签
,
蛋白纯化
时为何挂不上镍柱求解
答:
所以不能变性后挂柱啊!各位
还有
什么高招啊?小妹先谢过了。zhaocy8903(站内联系TA)用其它
纯化
手段anik(站内联系TA)有可能是你的his
标签
掉了,另一个就是你的镍柱没有还原彻底。wjswj(站内联系TA)曾经傻乎乎的用TE缓冲液溶
蛋白
去挂镍柱,结果……后来想想真好笑:)txstbbm(站内联系TA)这样呀,...
我也是做
蛋白纯化
的,
有
种蛋白第一次纯化时,也是非常杂,你之前又遇到过...
答:
一般可溶性表达都会遇同类问题,个人觉得
有
如下方面可以考虑:仔细研究填料的说明书,同样是His-tag或GST
标签
的填料,但不同厂家,或者不同分辨率,其缓冲液和洗脱浓度都是有差异的,务必注意!比如,在选择填料时,可选择颗粒稍微细些的填料,分辨率会更好些。在样品的各阶段都要控制杂
蛋白
,以最常见的...
用镍柱
纯化
带his
标签
的
蛋白
,蛋白过镍柱时忘记加wash buffer就加elute bu...
答:
buffer清洗镍柱,就直接用elute buffer洗脱了么。这样的话洗脱效果会比较差一些,洗脱的
蛋白
纯度会明显降低。虽然his
标签
的蛋白结合镍柱时特异性非常高,但因为种种原因总会有一些杂蛋白非特异性吸附在柱子上,所以要先用wash buffer冲洗掉这部分杂蛋白,再用elute buffer洗脱,已达到最好的
纯化
效果。
纯化后
的
蛋白
做western,出现很明显的两条带,请问是二聚体吗
答:
煮沸时间不够使得
蛋白质
变性不充分或者形成二聚体会导致实验效果不好,煮过头的情况我也没有遇到过(貌似还没有碰到人煮个5-10分钟还会煮成一小时的- -|||),不过肯定的是变性已经充分.可以试一试,当然也有可能蛋白质长时间高温沸水作用下部分降解.
蛋白纯化有
杂蛋白能用吗
答:
不能用了。1、
有
杂蛋白可能会不足以得到理想的纯度,所以不建议用了。2、
蛋白质
的分离
纯化
在生物化学研究应用中使用广泛,是一项重要的操作技术。 一个典型的真核细胞可以包含数以千计的不同蛋白质,一些含量十分丰富,一些仅含有几个拷贝。为了研究某一个蛋白质,必须首先将该蛋白质从其他蛋白质和非...
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