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IPTG过量会抑制蛋白表达嘛
.../BL(DE3)plysS
蛋白表达
的最佳温度,时间,
IPTG的
浓度,诱导时菌液的...
答:
一般是将菌摇到OD600=0.4-0.6,然后加入终浓度1mM的
IPTG
(这个一般不变,诱导不出来再考虑适当多加点,例如2-5mM),但是诱导时间和诱导温度根据诱导
蛋白
大小、性质的不同而不同,需要摸索的,你可以做个预实验,隔两个小时取样,最后SDS-PAGE,寻找合适诱导时间,如果不想这么麻烦,直接过夜诱导。诱...
IPTG
诱导
表达
答:
此时,I序列在P启动序列操纵下
表达
的Lac阻遏
蛋白
与序列结合,阻遏蛋白与O序列结合阻遏蛋白与序列结合,阻碍RNA聚合酶与序列结合,
抑制
转录起动。聚合酶与P序列结合阻碍聚合酶与序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳...
IPTG
诱导
表达
答:
此时,I序列在P启动序列操纵下
表达
的Lac阻遏
蛋白
与序列结合,阻遏蛋白与O序列结合阻遏蛋白与序列结合,阻碍RNA聚合酶与序列结合,
抑制
转录起动。聚合酶与P序列结合阻碍聚合酶与序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳...
IPTG
诱导
表达
答:
此时,I序列在P启动序列操纵下
表达
的Lac阻遏
蛋白
与序列结合,阻遏蛋白与O序列结合阻遏蛋白与序列结合,阻碍RNA聚合酶与序列结合,
抑制
转录起动。聚合酶与P序列结合阻碍聚合酶与序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳...
IPTG
诱导
表达
答:
此时,I序列在P启动序列操纵下
表达
的Lac阻遏
蛋白
与序列结合,阻遏蛋白与O序列结合阻遏蛋白与序列结合,阻碍RNA聚合酶与序列结合,
抑制
转录起动。聚合酶与P序列结合阻碍聚合酶与序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳...
真核原核
表达
系统的优缺点?
答:
在各种
表达
系统中,最早被采用进行研究的是原核表达系统,这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体(一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌),通过
IPTG
诱导并最终纯化获得所需的目的
蛋白
。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物,而且所需的成本相对比较低廉。但与...
昆虫细胞
表达蛋白
会形成包涵体吗
答:
昆虫细胞
表达蛋白
会形成包涵体 表达在上清内难道不是好事吗?为什么一定要包涵体表达?提高
IPTG
可能会增加包涵体的表达量,可以提高的1mM。提高转速不会有帮助的,而且一般摇床也不可能转太快。提高温度如果不是热诱导的蛋白可能会降低表达量。如果要增加包涵体的量,可以裂解后加快离心的转速。这样包涵体量肯定...
IPTG
诱导
表达
答:
此时,I序列在P启动序列操纵下
表达
的Lac阻遏
蛋白
与序列结合,阻遏蛋白与O序列结合阻遏蛋白与序列结合,阻碍RNA聚合酶与序列结合,
抑制
转录起动。聚合酶与P序列结合阻碍聚合酶与序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳...
iptg
诱导的时间和浓度是和什么因素有关
答:
有些药物可以
抑制
细菌的生长,但不见得在
蛋白
层次明显表现出来。你可以尝试从mRNA水平进行考虑或者转录因子角度进行考虑。mRNA水平的,你可以做mRNA
表达
谱芯片来看看你的mRNA表达的情况,相信在
IPTG的
作用下与没有IPTG组对比的mRNA表达是有比较大的差异的。但蛋白的表达就不见得了。
原核
表达
系统中通常使用的可调控的启动子有哪些?
答:
gene activation protein)因子和camp来激活启动子,促使转录进行。负调控则是由调节基因产生lacz阻遏蛋白,该阻遏
蛋白能
与操纵基因结合阻止转录。乳糖及某些类似物如
iptg
可与阻遏蛋白形成复合物,使其构型改变,不能与o基因结合,从而解除这种阻遏,诱导转录发生。(2)trp启动子:它来自大肠杆菌的色氨酸操纵...
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