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IPTG过量会抑制蛋白表达嘛
简要分析基因的
表达
系统的组成及优化策略。
答:
其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物,而且所需的成本相对比较低廉。但与此同时原核表达系统还存在许多难以克服的缺点:如通常使用的表达系统无法对表达时间及表达水平进行调控,有些基因的持续表达可能会对宿主细胞产生毒害作用,
过量表达
可能导致非生理反应,目的
蛋白
常以包涵体形式表达,导致产物纯化...
IPTG
诱导
表达
答:
此时,I序列在P启动序列操纵下
表达
的Lac阻遏
蛋白
与序列结合,阻遏蛋白与O序列结合阻遏蛋白与序列结合,阻碍RNA聚合酶与序列结合,
抑制
转录起动。聚合酶与P序列结合阻碍聚合酶与序列结合,抑制转录起动。当有乳糖存在时,lac操纵子(元)即可被诱导。在这个操纵子(元)体系中,真正的诱导剂并非乳糖本身。乳...
重组菌当中的外源基因是否
表达
可以通过几个层面进行分析
答:
外源基因在大肠杆菌中的
表达
及其检测 实验目的 了解
IPTG
诱导的外源基因在大肠杆菌中的表达的原理,掌握外源基因在大肠杆菌中的表达及其检测技术。实验原理 将外源基因克隆在含有lac 启动子的表达载体中,让其在大肠杆菌中表达。没有加入IPTG诱导剂的时候,lacI 产生的阻遏
蛋白
与lac 操纵基因结合,从而不
能
...
简述乳糖操纵子的负凋控机理。在实验室
IPTG
常用来做什么?
答:
大肠杆菌不
能
利用乳糖。②当有乳糖时,乳糖是调节基因
表达
出的阻遏
蛋白
的诱导物。诱导物与阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白空间结构改变,不能与操纵基因结合,这样结合在启动子上的RNA聚合酶就可以向前滑动,结构基因得以转录。异丙基硫代半乳糖苛(
IPTG
)在实验室常用来做乳糖操纵子的诱导剂。
原核
表达
发现在37℃诱导不出来原核表达测序回来如何判断
蛋白
译码
答:
在没有乳糖存在时,lac操纵子(元)处于阻遏状态,Lac阻遏物(即下图中的阻遏
蛋白
)
能
与操纵基因O 结合,阻碍RNA 聚合酶与P序列结合,阻止了转录的路径,从而
抑制
转录启动。而当有诱导剂(这里指
IPTG
)存在时,诱导剂可与阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白构象发生变化,导致阻遏物从操纵基因O上解离下来,RNA ...
什么是α-互补
答:
α-互补给pUC系列的载体带来了极大的方便:载体中就没有必要包含3kb以上的β-半乳糖苷酶的编码序列。只要包含lac启动子和操作子以及α肽编码序列再加上宿主菌的lac ZM15就行了。此外,为保证质粒的稳定性,宿主菌须是lac Iq即lac阻遏
蛋白过量表达
型。这样,只有在用
IPTG
诱导时,lac系统才能表达。当...
大肠杆菌中
表达
t7-rna聚合酶吗
答:
在细菌培养基中加入
IPTG
来启动
表达
,然后用与消化载体相同的内切酶进行消化和胶回收,阳性菌落数远大于阴性菌落。然后1,pH7。1,然后上样进行SDS-PAGE分析.总结(注意事项)(1)所有操作尽量在冰上操作通过大肠杆菌表达目的基因大量获得重组
蛋白
是一个方便快捷的方法。(6)37℃生长常常会使一些蛋白累积形成...
如何以大肠杆菌质粒DNA为载体克隆一个编码
蛋白
的基因,并使之在大肠杆菌...
答:
一般程序如下: 获得目的基因-准备表达载体-将目的基因插入表达载体中 (测序验证)-转化表达宿主菌-诱导靶蛋白的表达-
表达蛋白
的分析-扩增、 纯化、进一步检测。 [主要试剂 主要试剂] 主要试剂 1、LB 培养基。 2、 100mM
IPTG
(异丙基硫代-β-D-半乳糖苷) 2.38g IPTG 溶于100ml ddH2O ...
原核生物
表达
系统的构建原则是什么?
答:
gene activation protein)因子和camp来激活启动子,促使转录进行。负调控则是由调节基因产生lacz阻遏蛋白,该阻遏
蛋白能
与操纵基因结合阻止转录。乳糖及某些类似物如
iptg
可与阻遏蛋白形成复合物,使其构型改变,不能与o基因结合,从而解除这种阻遏,诱导转录发生。(2)trp启动子:它来自大肠杆菌的色氨酸操纵...
银环蛇毒素的毒素与基因工程
答:
胡延春等将扩增获得的α-BGT基因连接至pUCm-T载体构建克隆质粒pUCm-α-BGT,克隆质粒双酶切后连接至融合
蛋白表达
载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行
IPTG
诱导表达,表达产物经15% SDS-PAGE分析,得到约34 kD的重组α-BGT,其表达量约占细菌总蛋白的32.16%。Wastern blotting和间接ELISA检测结果表明,α-BGT的...
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