非常风气网www.verywind.cn
首页
IPTG过量会抑制蛋白表达嘛
IPTG
诱导
蛋白表达
的原理及实验步骤
答:
在原核
蛋白表达
系统中,诱导剂
IPTG
起着关键作用,本文主要探讨其诱导蛋白表达的原理和实验步骤。首先,原核基因结构独特,通常以操纵子形式存在,如E.coli的乳糖操纵子,包括Z、Y、A三个结构基因,分别编码相关酶,以及调控基因O和P。Lac阻遏物是这个系统的控制元件,它在没有乳糖时结合操纵基因O,
抑制
...
为什么加了
IPTG
诱导重组
蛋白
后细菌的生长速度明显减慢?
答:
有些药物可以
抑制
细菌的生长,但不见得在
蛋白
层次明显表现出来。你可以尝试从mRNA水平进行考虑或者转录因子角度进行考虑。mRNA水平的,你可以做mRNA
表达
谱芯片来看看你的mRNA表达的情况,相信在
IPTG的
作用下与没有IPTG组对比的mRNA表达是有比较大的差异的。但蛋白的表达就不见得了。
iptg
是什么
答:
3.结构与作用机制:
IPTG的
结构与乳糖相似,但它更加稳定且易于合成。在大肠杆菌等微生物中,乳糖操纵子是调控基因
表达
的关键部分。当这些微生物处于缺乏乳糖的环境中时,它们会寻找其他糖源来维持生命活动。IPTG作为一种类似物,可以与特定的受体结合,从而触发基因表达的开关,启动
蛋白质
的合成过程。这一...
蛋白质表达
一般的条件?
答:
一般影响
表达
的条件是温度,培养基PH值(一般为7.0),
IPTG
浓度,转速等,常用条件37度,OD600为0.5-1.0间,IPTG浓度我常用0.1mmOL/L,也可以高到1.5mmol/L。转速需要自己摸索,不要高于200r/min。不同的载体和基因都不同。并没有完全适用的万能条件。
发酵罐
iptg
诱导
答:
半乳糖是大肠杆菌细胞内的代谢产物,因此对细胞的生长没有影响,而异丙基醛则可以结合到lacI(反义表达子对P_lacQ)的结构域,使得lacI不
能
再结合到启动子P_lac的操作区域上,从而转录DNA,并开启目标蛋白的表达。因此,发酵罐
iptg
诱导可以方便快捷地进行
蛋白表达
和纯化。
IPTG
诱导
表达
后的
蛋白
上样问题
答:
IPTG
诱导后一般为胞内
表达
。1.检验
蛋白
的表达:取微量菌液,离心收获菌体,然后用PBS 之类重悬,洗涤菌体若干次,加入与菌液等量的PBS,取菌悬液与上样buffer混合,100度3min,取上清上样。对照为未诱导的菌体。2.蛋白的可溶性鉴定:离心取菌体后,用PBS重悬,超声破碎,分离上清和残片,上清直接制...
在利用大肠杆菌合成
蛋白质
时,有些情况下要添加
IPTG
,为什么
答:
表达载体构建成诱导型,有利于表达调控。
表达蛋白
并不总是需要最大程度表达,很多时候
表达过多会
生成包涵体,里面的蛋白是变性的,还需要再进行复性,不但麻烦,而且有些蛋白很难复性。所以一般如果发现生成包涵体,就会降低表达量,让它别产生包涵体。这时就要试验用不同浓度的
IPTG
诱导,因为不同的蛋白,不...
请教:诱导式
IPTG的
浓度应该好多
答:
有些药物可以
抑制
细菌的生长,但不见得在
蛋白
层次明显表现出来。你可以尝试从mRNA水平进行考虑或者转录因子角度进行考虑。mRNA水平的,你可以做mRNA
表达
谱芯片来看看你的mRNA表达的情况,相信在
IPTG的
作用下与没有IPTG组对比的mRNA表达是有比较大的差异的。但蛋白的表达就不见得了。一般是将菌摇到OD600=0...
如果
蛋白表达
量低是要增加
iptg
浓度还是降低iptg浓度
答:
如果
蛋白表达
量低是要增加
iptg
浓度还是降低iptg浓度 最近在做BL21表达,蛋白约为50KDa,质粒是PET15b,用
IPTG
诱导和不诱导之后跑SDS-PAGE都有蛋白条带,且浓度相当,这是不是渗漏表达?渗漏表达会产生什么影响?如何解决啊?重复诱导了两次都是这样的结果,请各位高手指点!
IPTG
诱导
蛋白表达
的原理及方法步骤
答:
乳糖进入细胞,经β-半乳糖苷酶催化,转变为半乳糖,后者作为一种诱导剂分子结合阻遏
蛋白
,使蛋白构象变化,导致阻遏蛋白与O序列解离,发生转录。异丙基硫代半乳糖苷(
IPTG
)是一种作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定,因此被实验室广泛应用。材料 1、诱导
表达
材料 (1) LB(Luria—Bertani)培养...
<涓婁竴椤
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
涓嬩竴椤
灏鹃〉
你可能感兴趣的内容
诱导时间对蛋白表达的影响
IPTG诱导浓度过高会怎样
诱导蛋白表达条件有哪些
诱导表达蛋白温度过高会有
IPTG诱导后表达量不如不诱导
IPTG加晚了会怎样
加了IPTG细菌还能长吗
IPTG抑制细菌生长
IPTG诱导表达条件
本站内容来自于网友发表,不代表本站立场,仅表示其个人看法,不对其真实性、正确性、有效性作任何的担保
相关事宜请发邮件给我们
©
非常风气网