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IPTG过量会抑制蛋白表达嘛
pproex-1和pet-30b载体的区别
答:
需要注意的是,大肠杆菌
表达
系统表达真核生物的
蛋白
时绝大部分情况是会以包涵体形式表达的,即使是可溶性表达非常好的pET系统也不
能
避免。所以如果表达的蛋白需要有活性,建议加入
IPTG
后,降低温度进行诱导(25-30),这样可以增加可溶性表达的蛋白的比例。另外如果只是用在制备抗体,那么则可以不用管是否是...
IPTG
产品参数?
答:
EINECS号:206-703-0 熔点 105 °C 比旋光度 -31 º (c=1, water)储存条件 −20°C 水溶解性 soluble 外观: 白色粉末 保存方法:2-8°C冷藏保存,配制好后保存于-20°C,室温可放置一个月 用途 常用分子生物学试剂,常用于蓝白斑筛选及
IPTG
诱导的细菌内的
蛋白表达
等 用途 是...
为什么标记基因在转基因受体里面根本不会
表达
呢,谢谢!
答:
第二,即便是不表达的标记基因,你就不
能
反过来想?比如最典型的例子,蓝白斑筛选:一段目的基因插入pMD-19T质粒,位点是半乳糖苷酶基因内部,标记基因也就是半乳糖苷酶基因,成功转基因的就应该不
会表达
半乳糖苷酶,因为标记基因在中间被打断了,然后质粒转入大肠杆菌DH5α,
IPTG
诱导下就无法产生半乳糖...
【菌周刊】简析大肠杆菌BL21及其衍生菌株
答:
通过添加L-阿拉伯糖可诱导araBAD启动子下游的T7RNA聚合酶表达,进而促进目的蛋白的表达。添加葡萄糖则可以
抑制
araBAD启动子下游的T7RNA聚合酶表达,抑制目的蛋白的表达。该菌株适用于任何以T7启动子为基础的表达载体,并
能
进行高水平的重组
蛋白表达
。操作步骤与之前的菌株类似,但需注意在冰浴下进行转化...
roseta菌株诱导
表达
,加入
IPTG
后发生菌溶现象,菌液变粘稠清亮,没有表达...
答:
可能是你的菌污染了,加入
IPTG
后菌会发生变化比原来的要清一点,但不会粘稠。你可以换用BL21(DE3 )试一下。只要你的
蛋白
含有的稀有密码子不是很多,BL21 的效果是相同的。
史上最离奇的OD回长事件
答:
2.活化诱导时加入的抗生素过低未加或失效,扩大培养时加入抗生素又
过量
,建议重新配制抗生素,这条也比较勉强。3.加入的
IPTG
浓度过高.4.培养基的问题,营养不足. ,这条不会!5.噬菌体污染,导致菌体降解。可以重新转化新的感受态细胞。6。对部分重组菌来说,过低的诱导前菌量常导致有毒性的IPTG诱导后...
iptg
与阻遏
蛋白
结合可逆吗?
答:
可逆 IPTG通过变构作用失活阻遏物,变构调控
蛋白
是可逆的。由于胞内无法降解IPTG,故而
IPTG能
持续失活阻遏物,达到诱导目的基因持续高转录的目的。
亮氨酸拉链的转录因子
答:
并将其克隆到Escherichia coli BL21,讨论了此亮氨酸拉链蛋白的
表达
条件.在
蛋白质
的小量表达试验中,重组子Escherichia coli BL21于5 mL含有50 μg/mL氨苄青霉素和34 μg/mL氯霉素的LB液体培养基中培养至对数期,加入不同浓度的
IPTG
,继续培养以诱导蛋白质的表达,在不同的时间( 如:诱导前,诱导2,...
在细胞培养基中加入了庆大霉素会影响
蛋白表达
吗
答:
这个应该是跟乳糖操纵子有关,在葡萄糖存在下,乳糖操纵子不
表达
的。有利于诱导前质粒的稳定,
抑制
加
IPTG
前培养基中少量乳糖的诱导 建议你用0.3陪的LB加M9培养基,当A600达到1.5左右时25度过液诱导
去年的菌本来
蛋白
的可溶性没有问题的 但是现在摇菌诱导的蛋白可溶性几 ...
答:
重新拿质粒转化吧。一般来说,做
蛋白表达
的菌液最好不要冻存,会影响菌的活性。即使转化的平板放置也不要超过一周。不要图方便,做表达还是小心一点。如果非要冻存,那么拿出来以后也至少先划个线,挑单菌落再做表达。另外,看一下之前的实验记录,是否其他步骤出了问题。比如诱导的温度、
IPTG
浓度等...
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