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IPTG过量会抑制蛋白表达嘛
蛋白表达
怎样促进诱导到包涵体里面?
答:
表达
在上清内难道不是好事吗?为什么一定要包涵体表达?提高
IPTG
可能会增加包涵体的表达量,可以提高的1mM。提高转速不会有帮助的,而且一般摇床也不可能转太快。提高温度如果不是热诱导的
蛋白
可能会降低表达量。如果要增加包涵体的量,可以裂解后加快离心的转速。这样包涵体量肯定会增多。另外即使是上清表达也...
加入IPIG诱导为何要将培养基条件调整为20摄氏度培养20h?
答:
应该是为了可溶蛋白
蛋白表达
吧。加入
IPTG
开始诱导后,为了
表达蛋白
尽量为可溶,会降低培养温度,使菌生长及表达蛋白速率变慢,以免太快的表达速率导致表达蛋白形成包涵体。
我用BL21(DE3)菌株
表达
一外源基因,用IPTG诱导,为什么我不加
IPTG的
...
答:
有两种可能,一种是大肠杆菌里本身有这么大小的
蛋白
,不过这个可能性太小。另外一个是叫做本底表达,就是你导入后目的蛋白在未诱导情况下也
会表达
,这可能是大肠杆菌产生了类似
IPTG的
物质,这个在原核表达中是很常见的,如果本底表达量不大的话对实验结果没什么影响的。
为什么用
IPTG
诱导
蛋白
没
表达
?
答:
中间有移码了,但用anti-myc做Western仍
能
检测到微量的目大小的条带,而将移码缺失补上后,目的条带变强了很多。可能的原因是移码时发生了小比例的 ribosomal frameshift,
表达
出了类似大小的带myc标签的
蛋白
。而你的目的片段如果突变出个终止密码子什么的,也可能表达出微量蛋白的。
不用
IPTG
诱导的重组
蛋白能
在BL21中
表达
吗,如果表达经SDS-PAGE电泳后能...
答:
不用IPTG当然可以
表达
,当然也可以在SDS-PAGE上看到。但是菌里有那么多
蛋白
,你不通过诱导你怎么知道哪个是你要的蛋白,难道仅凭marker吗?你必须通过IPTG诱导,然后用不加
IPTG的
做为对照,你才知道哪个是你要的蛋白,到底表没表达。希望可以帮到你,如需帮助请和我联系 ...
iptg
诱导前后在SDS电泳结果中怎么看
答:
加入
IPTG
后有目标
蛋白表达
,正常情况下,两个泳道相比,应该
能
在诱导后的泳道看到有某一个比较明显的蛋白条带的增粗。这个条带的位置可以根据目标蛋白的预计分子量大小来找,当然有时候不是严格与预测分子量一致,会多少有点出入,但是表达成功的话,会有明显不一样的条带的。如果表达量不大,就需要...
请教:
IPTG的
诱导原理是什么
答:
如果是做
蛋白表达
的话,冷诱导应该是指的低温诱导吧? 细菌37C生长到一定量,加入
IPTG
进行诱导表达,正常情况下应该在30C进行诱导表达。但是为了避免表达速度过快形成大量包涵体,所以选择更低温度进行诱导
IPTG
诱导大肠杆菌
表达
目标
蛋白
的作用原理是什么
答:
用乳糖操纵子作为启动子进行
蛋白质表达
的时候,需要诱导物进行诱导(相当于点火),但乳糖可以被细胞利用掉,所以利用
IPTG
(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)在结构上与乳糖的相似性也可以将基因表达启动,但它不能被细胞利用掉,从而实现持续的表达.
iptg
相比较乳糖诱导有何优越性
答:
IPTG不被菌体代谢,为乳糖类似物,一旦进入细胞就会产生持续长久的诱导效果,所以
IPTG的
诱导效率高,往往只需要很少量(1mmol/L)即可达到理想诱导效果。由于IPTG不被代谢,在胞内专一诱导外源
蛋白
的
表达
。不受细胞代谢的影响,诱导效果持续稳定。乳糖有双效作用,既
能
做为诱导剂异乳糖的前体物质,又可以做...
pET载体如何诱导
表达
答:
需要注意的是,大肠杆菌
表达
系统表达真核生物的
蛋白
时绝大部分情况是会以包涵体形式表达的,即使是可溶性表达非常好的pET系统也不
能
避免。所以如果你表达的蛋白需要有活性的话,建议加入
IPTG
后,降低温度进行诱导(25-30),这样可以增加可溶性表达的蛋白的比例。另外如果只是用在制备抗体,那么则可以不用管...
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