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IPTG过量会抑制蛋白表达嘛
异丙基-β-D-硫代半乳糖苷的用途说明
答:
常用分子生物学试剂,常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的
蛋白表达
等。乳糖类似物
IPTG的
主要功能是解除阻遏物对 Lac或 Tac启动子,诱导重组蛋白 bFGF的产生,采用摇瓶实验测定了 IPTG对E.coliJM103的生长的影响。 IPTG对不含质粒的E.coliJM103的最大生长速率和最终细胞密度无明显影响,而对于含质粒...
PGEX系列
表达
载体的特点
答:
pgex特点就是带有GST标签,可以增加目的
蛋白
的溶解度,别的没什么特点,属于大众型载体,目前也较常使用。你说的没有
表达
有没有做全菌的sds-page啊,不管是不是形成包涵体全菌电泳都应该有条带,至于形不形成包涵体就取决于你的
iptg
浓度和诱导温度了,iptg越低,温度越低可溶性越好,我们曾做过0.1的...
质粒图谱怎么看
答:
而是在质粒转入
表达
体系后起到作用的,基本上就是为了显示过表达或是敲减的基因是否正常运作。有的报告基因会融合在
蛋白
中表达,有的会另外用一个独立的启动子进行表达(比如shRNA的质粒中)。3.第三步,看多克隆位点:MCS(Multiple Cloning Site,也就是多克隆位点),一般图中会把多克隆位点上的酶...
如何阅读质粒图谱档 详细�0�3
答:
Tuner 菌株为 BL21 的 lacZY 缺失突变株,能够调整培养物中所有细胞的
蛋白表达
水平。 lac 通透酶( lacY )突变使得
IPTG
均匀进入群体所有细胞,从而具有浓度依赖、水平均一的诱导表达。通过调整 IPTG 浓度,表达可从极低水平调节到极强、完全诱导的表达水平(通常与 pET 载体相关)。低水平表达有时可能增强难
表达蛋白
...
几种感受态细胞的用途,基因型和特点
答:
特点:一种支持带有琥珀突变的载体生长的重组缺陷的
抑制
型菌株,对转染的DNA有修饰作用而无限制作用。4、BL21(DE3)菌株 用途:
表达
菌,可用于表达非毒性
蛋白
基因型:hsdSgal (c I TS857indl Sam7 nin5 lacUV5-T7)特点:该菌株用于高效表达克隆于含有T7噬菌体启动子的表达载体的基因。T7噬菌体RNA...
异丙基和正丙基的区别
答:
C健的位置不同和用处不同。1、C健的位置不同。异丙基是一个C健上面链接了两个C健。正丙基则是3个C健一个接一个地链接。2、用处不同。异丙基常用于蓝白斑筛选及
IPTG
诱导的细菌内的
蛋白表达
等。正丙基常用于工业生产中。
诱导
表达
时
IPTG
加的时间太早有影响吗?
答:
如果在菌没有进入对数期,即OD在0.4以下就加
IPTG的
话,对菌的生长有
抑制
作用.菌浓度过低,
蛋白
的
表达
量也会低,会影响到后期蛋白的检测.所以还是在菌对数期的时候加,即0.6-0.8,比较好
蛋白
用不用
IPTG
诱导
表达
量差不多
答:
不可能的 只有在特定的环境信号(加入IPTG)刺激下,目的基因才会被激活,之后才会产生大量的代谢表达产物,收集有较多表达量的菌体。如果不用
IPTG的
话,大部分目的
蛋白
是不
会表达
的,有少部分可能会有极少量的表达,称之为泄漏表达。所以蛋白用不用IPTG诱导表达量差很多 ...
诱导式
IPTG的
浓度应该好多?要试验确定吗
答:
一、需要做实验确定,诱导时
IPTG的
浓度一般情况是1mg/ml,不过有的蛋白有时不需要这么高的浓度。二、可以做一个梯度诱导,一般在菌浓OD600达到0.8-1.0的时候诱导。三、培养两个小时候后,每隔一小时取样,大约在3-5小时的时候
蛋白表达
达到最高值,最后收菌后,加上以前的取得样品跑SDS-PAGE胶检验...
使用T7启动子,BL21(DE3)菌株,加入的
IPTG的
终浓度要到多大才能起到诱导的...
答:
最佳浓度是1mM,但是这样非常容易形成包涵体。如果包涵体可以用的话,比如做抗体,那么当然是
蛋白
越多越好,不过大多数时候我们需要蛋白的可溶性
表达
,所以这个浓度也需要摸索。如果你的蛋白必须是可溶性表达的话,那么建议你用较低浓度的
IPTG
,我用过最低浓度是0.1mM,效果不错,当然这也需要你延长诱导的...
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