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蛋白原核表达
原核表达
菌液的OD值过高再去诱导
蛋白
可以吗
答:
一般都是在对数生长期进行诱导
表达
。OD值过高,细菌可能已经老化,诱导也表达量较少甚至不表达
载体pet28a构建重组质粒,测序准确,转至BL21
原核表达蛋白
,,怎么也诱导...
答:
1 可能是太弱你看不出来,建议用His抗体做个western 看看是不是有条带而看不出。2 是不是融解性太差,建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体
原核表达
时裂解缓冲液的真的有裂解作用吗?
答:
回答:一步法细菌活性
蛋白
提取试剂采用一种温和的可以通过透析去除的,破裂细菌细胞,溶解蛋白,而不会产生变性的非离子型去污试剂从大肠杆菌中提取可溶性蛋白,不需要超声等机械细胞破碎方法,该试剂可以从细菌裂解液中提取可溶性蛋白和回收包涵体蛋白,而且提取效率要高于超声等机械细胞破碎方法,提取的可以溶性...
求求。。。进行
蛋白质
分离纯化前,小试管预实验法具体步骤???望高手指点...
答:
既然是小“试管”,应该是
原核表达
吧,一般多用lacZ启动子来诱导表达,你没多说,我就按这个步骤来说:1,检测
表达蛋白
的可溶性:用新鲜菌种接种5ml或10ml摇菌,先37℃摇,3小时后诱导3h(这个温度和时间有文献参考是最好的),收菌体,用pbs洗2遍,再1mlPBS悬浮,破菌(超声,或加溶菌酶,或试剂...
在大肠杆菌中
表达
真核
蛋白
要注意什么
答:
大肠杆菌属于
原核表达
系统,不具有翻译后修饰的功能,也就是不能做糖基化之类的修饰。要注意真核
蛋白表达
出来可能和在真核表达系统表达出来的有差异,非常有可能错误折叠成包涵体表达。不具有生物学活性。而且大肠杆菌系统和酵母,哺乳动物细胞系统对于密码子的偏好也不一样,所以表达不出来的可能性也很大。
真核基因在
原核
细胞中
表达
需要解决哪些问题
答:
第二,要用原核的启动子.检查一下真核基因密码子偏好是否存在
原核表达
系统的稀有密码子.那个稀有密码子的氨基酸会成为表达量的瓶颈.如果有,点突变之.第三,真核基因可能在表达过程中需要有分子伴侣帮助折叠成正确的构象才会有活性.如果单独的
蛋白
没有活性,应该考虑是否需要同时克隆分子伴侣基因.第四,注意...
原核
和真核复制,mRNA转录,
蛋白
翻译,基因
表达
调控的异同
答:
原核
生物没有内含子,DNA复制和转录相对较容易也比较简单,调控几乎完全由基因上游的RNA聚合酶结合位点控制;而真核生物由于内含子的存在,有了“可变剪接”的可能,内含子也可以调控部分DNA合成的问题,比如针对环境变化调整转录出的
蛋白质
的结构、组成等;另外,真核原核生物的核糖体也是不一样的,其中...
诱导
表达蛋白
为什么要使用t4噬菌体的启动子而不用大肠杆菌自己的启动...
答:
原核表达
系统中通常使用的可调控的启动子有Lac(乳糖启动子)、Trp(色氨酸启动子)、Tac(乳糖和色氨酸的杂合启动子) 、lPL (l噬菌体的左向启动子)、T7噬菌体启动子等。(1)Lac启动子:它来自大肠杆菌的乳糖操纵子,是DNA分子上一段有方向的核苷酸序列,由阻遏
蛋白
基因(LacI)、启动基因(P)、操纵基因...
请说明在
原核
细胞中
表达
真核基因,合成真核
蛋白
存在的主要问题。_百度知 ...
答:
原核
细胞中缺乏高尔基体等细胞器,无法将多肽变成具有一定空间结构的
蛋白质
。此外,原核生物的基因中不含内含子,真核生物基因中存在内含子。内含子是真核生物细胞DNA中的间插序列。这些序列被转录在前体RNA中,经过剪接被去除,最终不存在于成熟RNA分子中。原核细胞无法识别内含子,在
表达
真核基因时,会...
原核
生物引物设计his标签设计原则
答:
如果你的
蛋白
可以用亲和层析等非His tag的办法进行纯化,而且在
原核
里面
表达
后具备亲和层析的活性,就可以不用融合表达。但这时候你需要换载体或对原载体进行改造。因为N端的tag是必须带在你蛋白N端的(如果用pET32a的话)。当然N端的tag带上没坏处,就是需要买EK酶(有点贵)。还需要在纯化后再过...
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