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蛋白原核表达
什么是
原核表达
系统?
答:
原核表达
系统中通常使用的可调控的启动子有lac(乳糖启动子)、trp(色氨酸启动子)、tac(乳糖和色氨酸的杂合启动子)、lpl (l噬菌体的左向启动子)、t7噬菌体启动子等。(1)lac启动子:它来自大肠杆菌的乳糖操纵子,是dna分子上一段有方向的核苷酸序列,由阻遏
蛋白
基因(laci)、启动基因(p)、操纵基因(...
蛋白表达
纯化实验中,如
原核表达
纯化,蛋白总是包涵体该怎么办?请大神帮...
答:
原核蛋白表达
纯化是很容易形成包涵体的,在现阶段可以采用俩种手段,一是预防,二是复性。先说“预防”,预防就是指在蛋白过表达形成包涵体前,对表达环境进行优化的一些手段,来降低重组蛋白合成的速率。例如:密码子优化,表达温度的选择,与分子伴侣或折叠酶共表达等等;而
蛋白质
的复性则是指:在变性...
简述常用的
蛋白表达
系统有哪些
答:
1、宿主。
表达蛋白
的生物体。可以为细菌、酵母、植物细胞、动物细胞等。由于各种生物的特性不同,适合表达蛋白的种类也不相同。2、载体。载体的种类与宿主相匹配。根据宿主不同,分为
原核
(细菌)表达载体、酵母表达载体、植物表达载体、哺乳动物表达载体、昆虫表达载体等。载体中含有外源基因片段。通过载体...
原核表达
出来的
蛋白
纯化后怎么是三条带
答:
可能是
蛋白
发生了降解,在
表达
后期、纯化前期需要加入蛋白酶抑制剂。
做
蛋白
的
原核表达
时为什么总是不稳定,明明上次已经有表达了,现在又老做...
答:
这个很正常,我也碰到过,有时候是找不出原因的,只能再转化,设置重新开始,筛选稳定的了。
问个问题哦,我进行的是
原核蛋白表达
,表达载体是PET32a,表达菌液超声...
答:
首先得判断
蛋白
条带是否正确,因为32a表达过程中,会在目标蛋白上加上部分自己序列,所以电泳图谱中你所要表达的蛋白,应该比你自己预期的大20-30kDa。其次,
原核表达
,只是表达了酶蛋白序列,但蛋白序列与酶之间不能划等号,要有一个正确的加工之后形成合适的二、三级结构,蛋白才有活性 ...
原核表达
分子量特别小,跑胶是不是看不到啊
答:
我不知道你所说的分子量特别小是指的
表达
的基因的分子量小还是表达产物的
蛋白
分子量小。不过一般无论DNA还是后面的蛋白都是可以看到的。一般如果要表达的DNA片段太小看不到的话基本上是做双酶切鉴定的时候会出现,因为片段太小会导致从载体上切下了的片段总的质量太小而染色看不清,这时只要增加原始...
原核表达
时终止密码子需要删除吗
答:
不用删除。主要是看载体谱图和你自己需要的,一般pET系列载体有时候会为了
表达
的
蛋白
纯化方便,会在你的蛋白C端后面添加一些标签,这些标签后面都带有终止子。如果你觉得你不需要载体所自带的这些标签,你可以自己添加上终止子。
做
蛋白
在真核细胞的
表达
,但是表达量很低,怎么解决
答:
实际上真核生物的蛋白也可以用真核细胞
蛋白表达
系统来实现,而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化的蛋白性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建...
真核表达载体和
原核表达
载体的区别越详细越全面越好
答:
如果说载体的重组,没区别,都是一样的酶切加连接。细菌转化也一样。真核载体在细菌中也可以进行增值。表达的话,一般原核是直接转化细菌通过ISPG诱导进行表达,
蛋白表达
后的形式一般是通过包涵体或者是分泌型蛋白存在,这种蛋白如果是真核基因来源,不一定拥有相应的蛋白生物活性,因为
原核表达
缺少真核转录...
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