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蛋白原核表达
蛋白
纯化——His标签与GST标签
答:
在标签
蛋白
纯化过程中,合适的标签不但有利于蛋白的纯化,促进蛋白的可溶性,同时还不能影响蛋白的结构功能和下游应用。His-Tag(组氨酸标签)His-Tag(组氨酸标签)His-Tag 由6-10 个组氨酸残基组成,分子量不到0.84KD,通常插入在目的蛋白的C 末端或N 末端。His-Tag是目前
原核表达
最常用的标签,蛋白...
一段
原核
生物的基因,
表达
为
蛋白质
需要哪些功能序列和位点
答:
1、Operon操纵子:一个或几个结构基因与一个调节基因和一个操纵基因,加上启动子构成一个操纵单元,这个单元称为操纵子。在操纵子中,结构基因产生mRNA并作为模板合成
蛋白质
;而调节基因则产生一种阻遏蛋白与操纵基因相互作用;阻遏蛋白与操纵基因结合从而阻碍了结构基因转录成为mRNA;在诱导过程中,诱导物...
为什么要让真核生物的基因在
原核
生物中
表达
并纯化
蛋白
呢?
答:
实际上真核生物的蛋白也可以用真核细胞
蛋白表达
系统来实现,而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化的蛋白性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。
100KD 的
蛋白质
在大肠杆菌中好
表达
吗
答:
蛋白大小和表达强弱没有密切的关系(当然过大的
蛋白质 原核表达
困难),要看你的蛋白的来源(原核还是真核来源、是否经过修饰等).不好表达.表达出来活性也很可能没有.大肠杆菌表达系统缺乏 糖基化 .
我做
原核表达
,PET32a连入目的基因用的是BamHI和SalI两个位点,请问表达...
答:
这说明你的目的
蛋白
没有
表达
,因为PET32a空载表达的蛋白就有20KD左右,当然诱导时间长了表达量就会越大
请问
表达蛋白
时对载体质粒有要求吗,我要做
原核表达
,现有很多质粒可作为...
答:
主要看,你后续实验了,要纯化不?还是要用于制备抗体等。pET32a有个11kDa的用于分泌到膜间腔的导肽,有利于
表达蛋白
的折叠。
原核表达
菌液的OD值过高再去诱导
蛋白
可以吗
答:
一般情况下 OD值在0.5~0.8都可以诱导,其实1也可以 但是超过1最好还是别诱导了。。。
实验室准备采购,留作久用,请大家推荐
表达
效率不错的
原核
载体,比如pET...
答:
原核表达
载体的构建及其原核表达进行了初步研究。首先通过基因拼接法合成VP3基因并委托生物技术公司合成改良型TAT-PTD基因。然后于原核表达载体pGEX-6p-1上构建改良型TAT-PTD-VP3融合
蛋白
的基因。最后将构建好的原核表达载体转导入基因工程菌DH-5α中并诱导其表达。
这个
蛋白
如何
表达
?
答:
首先你的蛋白偏小,不容易表达,而且如果你的SDS-PAGE浓度以及电泳时间掌握不好即使表达了也可能看不到。第二,不是什么蛋白都能
原核表达
,比如跨膜蛋白经常无法表达,看看你的蛋白又没有跨膜区。或者也有可能蛋白不稳定,很容易降解。总之,
蛋白表达
没有通用的好方法,只有不断模索,比如换载体,换条件...
细胞与分子生物学常用实验技术图书目录
答:
包装慢病毒载体,用于基因表达调控与疾病模型构建。第五章 RNAi技术 利用RNA干扰原理,研究基因功能,抑制特定基因表达。第六章
蛋白原核表达
与纯化 原核系统表达蛋白,通过纯化技术获得高纯度蛋白质样本。第七章 酵母双杂交筛选与验证 筛选与验证蛋白质间相互作用,深入理解细胞信号传导机制。第八章 Western-...
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