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融合表达蛋白没有活性
构建了水稻目的基因与GFP的
融合蛋白
,观察绿色荧光。效果不好。想问下...
答:
GFP还是相当稳定的。体外不太容易降解,体内降解的半衰期也蛮长的。
如何提高目的
蛋白
的可溶性
表达
答:
5.使用特定的菌株.AD494,which has a mutation in thioredoxin reductase (trxB).Origami,a double mutant in thioredoxin reductase (trxB) and glutathione reductase (gor).6.与可溶性partner
融合表达
.7.表达目的
蛋白
的一个片段.> 70 kDa的蛋白在大肠杆菌中是很难表达的.8.体外去折叠,...
如何根据
蛋白
的
活性
部位选择相应的抗体进行免疫荧光实验
答:
由于Flag标签可位于蛋白质的C端或N端,这一系统已用于各种细胞类型,包括细菌、酵母和哺乳细胞。由于Flag标签系统的纯化条件是非变性的,因此可以纯化所有
有活性
的
融合蛋白
。EarthOx的Anti-Flag Tag Monoclonal Antibody 可以用于检测和Flag标签
融合表达蛋白
的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测Flag融合...
融合蛋白
酶切后,标签蛋白和目的蛋白分不开
答:
融合蛋白
酶切后,标签蛋白和目的蛋白分不开 我构建了pet43.1a-scFv-pd1-her2质粒,让其原核
表达
,然后用镍柱纯化。其中pet43.1a本身表达NUS-his蛋白。我把表达的nus-his-scFv-pd1-her2用凝血酶酶切后,无论是在his柱上切割还是柱下切割 都不能把scFv-pd1-her2和NUS-his进行分开。
蛋白
的
表达
与纯化
答:
任何关于目标蛋白的已知信息都有助于载体选择。例如,一些蛋白的
活性
要求一个或两个末端
没有
外源序列。许多 pET 载体能够克隆非融合序列,然而如果特定翻译起始序列不能在大肠杆菌中有效利用,
表达
水平可能受影响。在这些情况下,常可用有效表达的氨基末端序列构建
融合蛋白
,然后在纯化后用位点特异性蛋白酶消化去除融合序列。
外源基因在原核细胞中
表达
时
蛋白质
的存在形式有哪些?
答:
2.
融合蛋白质
(Fusion proteins):有时,在外源基因
表达
时,可以将外源基因与宿主细胞中的其他蛋白质基因进行融合,生成一个新的融合蛋白质。融合蛋白质由外源蛋白质的序列和宿主蛋白质的序列组成,具有宿主蛋白质和外源蛋白质的性质和功能。3. 表达为融合蛋白后进行切割释放
的蛋白质
(Cleaved proteins)...
最近拿镍柱做实验,可纯化不到His-tag
融合蛋白
,求高手指点原因
答:
首先找一种正常的标签
蛋白
进行一下纯化试验,如果能够纯化出来那就是你的蛋白的问题,可能是蛋白在
表达
的时候非正常折叠,标签被折叠在内部,
没有
在蛋白表面游离着,这样的话当然不会被镍柱捕获了。比较严重的情况就是包涵体的形成,是否形成包涵体你可以根据蛋白的性质反应或者是电泳检测一下离心后的细胞...
嵌合
蛋白
是什么意思?
答:
嵌合蛋白既有优点也有缺点。嵌合蛋白的生产工艺相对成熟,且获得高纯度的嵌合蛋白也相对容易。此外,嵌合蛋白结构稳定,具有较好的生物
活性
和生物相容性,可广泛应用于医学领域。然而嵌合蛋白的应用也存在一些缺点,如需要严格的反应条件和高昂的生产成本等。此外,嵌合蛋白对于
蛋白质
结构和功能的影响需要进一步...
gst融合蛋白是什么?和His-tag
融合蛋白有
什么区别么?
答:
gst
融合蛋白
是将谷胱甘肽S转移酶(glutathione S-transferase)与目标蛋白做成融合蛋白的方式在外源
表达
His-tag融合蛋白是六个连续组氨酸标签与目标蛋白做成融合蛋白的方式在外源表达
我想在目的
蛋白
的C端
融合表达
3X HA-Tag 请问3X HA-Tag的序列是什么...
答:
HA(血球凝集素)其免疫表位氨基酸序列常为:YPYDVPDYA 具体的基因信息你可以去NCBI上查找下,供参考:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/FJ905207.1 其中 misc_feature :complement(983..1012)/note="HA-tag"在他这个载体中983bp-1012bp的基因是HA-tag的序列。又如:http://www.ncbi....
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