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诱导表达蛋白上清和沉淀都有
wb实验的原理和步骤
答:
与相对应的第一抗体特异性结合,之后再与酶或同位素标记的第二抗体相结合,最终通过底物显色或放射自显影来检测特异性目的基因
表达
的蛋白成分。
蛋白质
样品制备 原始样品可为细胞、组织、培养
上清
、免疫
沉淀
或亲和纯化的蛋白,以下为定性检测目的蛋白时细胞样品的处理方法,其余的样品制备方法参阅相关文献。 1.培养细胞或药...
尿酸氧化酶做
表达
纯化和活性鉴定
答:
不过大肠杆菌发酵比较简单,性价比高一点 表达载体可以用pET43,菌株DH5a,LB培养基37度
诱导表达
菌体以破碎缓冲液悬浮,经过超声破碎,离心,
上清
经硫酸铵分级
沉淀
,进行粗分离; 盐析后,收集脱盐峰过阴离子柱,尿酸氧化酶穿出,而杂质保留; 穿出原液过阳离子柱,目的
蛋白
结合,洗脱得到纯品。在pH8.4...
tca
沉淀蛋白
是tca浓度一般是多少
答:
TCA
沉淀
法 培养基上清直接电泳跑出来的条带经常很难看,可以TCA沉淀浓缩后跑电泳,一般表达量大于1mg/ml可以看到明显条带,这是我用的TCA沉淀方法,效果很好:1.菌液10000g,离心5分钟,收集
表达上清
。2.取500-1000ul上清于EP管中
重组菌当中的外源基因是否
表达
可以通过几个层面进行分析
答:
4.为防止相邻泳道样品的扩散,而导致电泳条带的不整齐,如有空置的加样孔,须加等体积的空白1×SDS样品缓冲液。电泳样品的准备 1.浓度 单一成分1—10μg,若浓度太稀,应
沉淀
后再进行电泳;对于非单一成分的样品,如基因工程大肠杆菌的
表达
产物,其
蛋白
量50~100μg可取得较好的分离效果。2.体积...
如果有人在研一的时候教我这样做实验就好啦(GST pull-down)
答:
蛋白带模糊不清可能由洗脱条件不足或蛋白纯度不高引起。增加洗脱液中洗脱剂浓度、提高纯度或采用其他柱层析方法有助于提高分辨率。区分
蛋白表达
在
上清
还是包涵体时,超声后菌液清澈、
沉淀
少表示蛋白可溶;浑浊、离心后沉淀多且颜色白表示蛋白主要在包涵体中。
GST pull-down 技术原理及实验流程——钟鼎生物
答:
1.4 向菌液中加入IPTG至终浓度为0.5 mM,11~28℃摇床培养,
诱导
融合
蛋白表达
4~8h;1.5 将菌液离心弃
上清
,用 PBS重悬菌体
沉淀
,超声波破碎,离心取上清;1.6 吸取少量上清用于SDS-PAGE检测目的蛋白表达情况。2.细胞破碎
及蛋白
纯化 采用超声破碎,GST柱亲和纯化及Ni柱亲和纯化,分别获得纯化后的...
WB实验干货-实验介绍、
蛋白
提取、蛋白定量
答:
根据细胞
沉淀
的量加入适量的完全裂解液,例如沉淀体积为绿豆大小(大概10uL左右)的加入大约200μL完全裂解液,加入适量研磨珠,放入研磨仪进行裂解;裂解完成后,12000rpm,4℃,离心10分钟,
上清
即为总
蛋白
溶液。3.贴壁细胞提取蛋白:倒掉培养基,沿细胞培养皿侧壁或培养瓶瓶口慢慢加入PBS溶液,轻轻晃动平...
如何对包涵体
蛋白
进行
表达与
复性
答:
收集
上清
进行
蛋白
浓度及活性测定。复性前对蛋白的性质一定要清楚 :1. 蛋白预期的二级结构都是些什么。一般来说beta sheet占多数的蛋白较易复性 2. 蛋白pI 3. 氨基酸组成,比如有没有cystine 4. 有没有底物?如果有结合的ligand之类,通常加入后会有所帮助,5. 一般尿素中含有非常高的一种杂质(暂时...
这道题c和d不是自相矛盾吗 为啥选d不选c
答:
不矛盾,D可以理解成 不离心也能检测到,也可以理解成
上清
液放射性低,
沉淀
物放射性很高,总之D错 C说DNA
与蛋白质
完全分开是指 艾弗里体外转化实验有并不能把S型菌的DNA与蛋白质完全分离的缺点,然而噬菌体侵染细菌实验只有DNA进入细胞,DNA与蛋白质完全分开,检测时不必考虑带有放射性标记
的蛋白质
...
包涵体
蛋白
怎么在
上清
中
表达
答:
蛋白质在大肠杆菌中的高水平表达,常常导致形成相差显微镜下可见的细胞质颗粒或包涵体。这些由
表达蛋白
聚集成的包涵体很容易与可溶性蛋白和膜结合蛋白分离。高水平表达外源蛋白的细菌经离心浓缩后,可通过机械法、超声处理法或溶菌酶加去污剂的方法进行裂解。包涵体经离心
沉淀
后,可用Triton X-100和EDTA或用...
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