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诱导表达蛋白上清和沉淀都有
纯化回收的
上清蛋白
析出还有活性吗用
答:
这个不好说的 首先要确认析出的
蛋白
是否可以复溶,如果不能复溶就肯定不会有活性。如果可以复溶,那么还是具有有活性的可能。然后,析出的原因也较多,如果是因为盐浓度较高导致的析出,重新复溶后具有活性的可能性较大,如果是因为pH原因造成的
沉淀
析出,即使能够复溶有活性的可能性也比较小了。另外...
E-cadherin、N-cadherin与侵袭转移
答:
因此,对于乳腺癌, N-Cadherin才是肿瘤侵袭的关键
蛋白
。 图8.不同乳腺癌细胞中E-cadherin和N-cadherin的
表达
,来自文献(6) 大多数肿瘤中,N-Cadherin都可以作为肿瘤侵袭的启动子,经常被上调。上皮细胞中N-Cadherin的表达可
诱导
成纤维细胞表型的形态学改变,使细胞更具运动性和侵袭性。然而,有一些癌症,如骨肉瘤,N-...
蛋白质
电泳问题
答:
我做过G-25柱,效果不错。我所在小组也用过磷酸缓冲液做纯化,也用透析除盐,同样也遇到过和你一样的问题,洗脱峰明明有光吸收,可是就是跑胶没带,现在这个问题已经解决,呵呵,很有可能你跟我们的问题一样。问题关键是:
蛋白
浓度!我们的蛋白本身易降解,且纯化率低,蛋白浓度很低,再加上透析、...
如何分离未彻底破碎的细胞及包涵体
答:
结果:
沉淀
部分几乎没有条带,
上清
部分有条带,但是都比之前浅和很多。沉淀部分几乎没有条带说明几乎没有不可溶的重组蛋白,但这是不可能的,因为有许多文献报道这个蛋白在大肠杆菌中
表达
的大部分都是不可溶蛋白,少量是可溶的。所以我推测这次我又将不可溶
蛋白和
未破碎菌体都离心后去掉了。
影响木霉
蛋白
分泌途径效率的生理和突变调控
答:
内质网中未正确折叠的分泌蛋白能启动UPR途径(Hetz et al.,2009;Malhotra et al.,2007),当未正确折叠蛋白在内质网中累积时,编码内质网折叠
蛋白和
伴侣分子的基因、编码内质网相关蛋白降解途径的基因和一部分转运蛋白基因及糖基化相关基因将被
诱导表达
。研究发现T.reesei中UPR途径及其激活机制与其他生物的既有相似又有不...
最近拿镍柱做实验,可纯化不到His-tag融合
蛋白
,求高手指点原因
答:
这样的话当然不会被镍柱捕获了。比较严重的情况就是包涵体的形成,是否形成包涵体你可以根据蛋白的性质反应或者是电泳检测一下离心后的细胞破碎液
上清和沉淀
中目的蛋白的分布情况。如果形成包涵体那你就需要先使
蛋白质
尽可能的溶解了,可以加入一些变性剂,比如尿素。当标签暴露出来之后就比较容易挂柱了。
GST pull down 实验细节问题求教
视频时间 6:11
在做原核
表达
时带his组氨酸的目的
蛋白
怎么也结合不上镍柱,为什么?_百度...
答:
这样的话当然不会被镍柱捕获了。比较严重的情况就是包涵体的形成,是否形成包涵体你可以根据蛋白的性质反应或者是电泳检测一下离心后的细胞破碎液
上清和沉淀
中目的蛋白的分布情况。如果形成包涵体那你就需要先使
蛋白质
尽可能的溶解了,可以加入一些变性剂,比如尿素。当标签暴露出来之后就比较容易挂柱了。
免疫
沉淀
实验细节
答:
预处理后,将特异性抗体加入裂解液,抗体与抗原结合形成免疫复合物。接着,通过固相基质如蛋白A或蛋白G结合的琼脂糖或聚丙烯酰胺微珠进行纯化。这些基质对抗体的Fc段有高亲和力,能够有效分离出结合的抗原抗体复合物,去除未结合
的蛋白质
。总的来说,免疫
沉淀
实验通过精心的步骤设计和优化,确保了抗原的纯度...
原核
表达
如何调到
上清
答:
pH值等环境因素。2、使用合适的
诱导
剂或激活剂来促进基因
表达
,如添加特定物质或改变培养条件。3、优化转染或转化技术以确保外源DNA能够稳定地进入细胞,并在细胞内进行表达。4、在转染或转化后采取相应措施来筛选和鉴定高效表达的菌株,并进行进一步培养和分离纯化目标
蛋白
。
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