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诱导表达蛋白上清和沉淀都有
Ni-NTA纯化问题,获得不了纯的目的
蛋白
!
答:
2,如果重新构建不可行,对于你的先行体系,建议如下:适当延长
诱导表达
时间,以增加目的
蛋白
含量;在用咪唑梯度洗之前,先过3-5倍柱体积的buffer,先洗掉一部分杂蛋白,填料要保证已处理充分,既没有上次剩余的蛋白也有足够ni;不要用这么多的梯度,有一点你需要明白,根据你现在的结果来看,60mM的咪唑...
植物
蛋白
萃取
答:
2. 35000g离心10min,去
上清
。在
沉淀
加入原体积丙酮,吹打重悬,-20摄氏度沉淀半小时。3. 重复2两次 4. 将沉淀放入真空冷冻抽干机抽干十分钟 5. 用水或者其他蛋白裂解液溶解干粉,超声5min,40000g离心,取上清即为你需要
的蛋白质
。需要设备仔细看实验步骤
都有
:离心机,超声仪,冷冻干燥机 ...
基因原核
表达
的详细过程
答:
重组
表达
质粒经EcoRI和KpnI双酶切后能产生出327bp、4980bp大小的两个片段,序列分析表明重组表达质粒包含人resistin基因完整编码区,基因编码无移位,PAGE凝胶电泳表明在细菌裂解
上清有
分子质量为39.5kD的融合
蛋白
。【结论】 成功构建了人resistin基因原核表达载体,且构建的载体能表达出含目的蛋白的融合蛋白,为下一步研究打...
细胞培养
上清
中
蛋白
怎么纯化
答:
所以可通过调节盐浓度将目的
蛋白沉淀
析出。被盐析沉淀下来
的蛋白质
仍保持其天然性质,并能再度溶解而不变性。3.有机溶剂沉淀法中性有机溶剂如乙醇、丙酮,它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低,进而从溶液中沉淀出来,因此可用来
沉淀蛋白质
。
...western鉴定,那么转染之后
上清和
细胞怎样收样?
答:
上清
收了做ELISA 细胞直接裂解提
蛋白
做WB
三倍体积丙酮
沉淀
鸡卵黏
蛋白
时,第一次(10%TCA提取鸡卵黏蛋白离心后的...
答:
为了使效果更好
...用什么方法能得到
蛋白质
溶液而不含那些
沉淀
物!(离心后有杂质...
答:
,该裂解液作用是将
蛋白
溶解---再次离心---此时
沉淀
中含有的蛋白已经很少,而
上清
中含有的多是蛋白,核酸及多糖---再加入适当体积的核酸酶除去核酸--最后上清中得到的多是蛋白。至于楼主说的离心后沉淀不稳,是不是因为离心g和时间还不够,可以尝试一下改变条件,我们用的是20000g以上离心半小时。
细胞内的il-6或il-8
蛋白与上清
中的
蛋白有
何差别
答:
研究重组人乳铁
蛋白
(rhLF)对口腔鳞癌Tca8113 细胞中促炎症反应细胞因子IL-6和IL-8
表达
的影响,探讨其抑制肿瘤细胞生长的可能机制。
免疫共
沉淀
实验过程
答:
首先,在转染24-48小时后收获细胞,用细胞裂解缓冲液(含
蛋白
免疫共
沉淀
酶抑制剂)在冰上裂解30分钟。随后,4°C下以最大转速离心30分钟,收集
上清
。取少量裂解液备作Western blot分析,剩余裂解液加入1μg特定抗体,于4°C缓慢摇晃孵育过夜。然后,取10μl蛋白A琼脂糖珠,用适量裂解缓冲液洗涤3次,...
在科学史上是通过怎样的实验如何证明的DNA是遗传物质?
答:
他们先分别用含P32的磷酸盐培养基和含S35的硫酸盐培养基培养大肠杆菌,接着用T2噬菌体侵染大肠杆菌,这样就分别得到了带P32标记核酸和S35标记
蛋白质
衣壳的噬菌体。用带标记的噬菌体分别侵染普通的大肠杆菌,一段时间后离心,再分别检测离心后的
上清和沉淀
中的放射性。该实验又被称为搅拌机实验(Blender Experiment),...
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