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原核表达蛋白没有表达啥原因
原核表达
菌之前可以表达蛋白,为什么放一段时间
不表达蛋白
了
答:
原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等
,结果就造成蛋白表达变少或者不表达。
原核表达
目的
蛋白不表达
怎么办
答:
不过你的蛋白不表达,
很可能是形成了包涵体
,这个是一个非常大的问题,更换可溶性表达标签是一个方法 建议你去查一查文献
构建的
原核表达
载体,测序也正确,为什么有的就
不表达
目的
蛋白
?
答:
先测序看看序列是不是三的倍数,保证是连接到载体上,并且载体也是转入表达菌的,不行的话,通常做法是调节诱导剂浓度,诱导时间,不行就换载体,如BL21换ROSSETTA等,再不行就换载体。其实我也遇到,有个
蛋白
始终
没有表达
,没办法放弃了。
原核表达
,为什么空载表达的很好,目的
蛋白没有表达
,可能的
原因
有...
答:
目的蛋白的表达跟基因本身关系密切,载体,表达条件关系也很大。
空载体能表达不代表你的蛋白能在该条件下表达
。
我做
了表达
实验,但却
没有
目标
蛋白
的表达,为什么
答:
用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化的
蛋白
性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候,一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列...
原核表达 蛋白没有
反应原性怎么办
答:
最主要区别,
原核
生物基因
没有
内含子,不会对
表达
的mRNA做剪切修饰,这就使得一些真核
蛋白不
能正确的折叠,导致活性降低或者失活。真核细胞有一套自己的表达修饰系统,可以对类似的蛋白进行修饰。
...测序准确,转至BL21
原核表达蛋白
,,怎么也诱导不出来?同批次的BL21...
答:
1 可能是太弱你看
不
出来,建议用His抗体做个western 看看是不是有条带而看不出。2 是不是融解性太差,建议将你的氨基酸序列做个疏水性分析。如果确实如此的话可能要重新构载体
原核表达
未诱导与诱导差别
不
大
什么原因
答:
蛋白
直接
没有
诱导出来。导结果差别
不
大的话,是蛋白直接没有诱导出来,换个载体重新构建质粒导入新的感受态细胞试着再诱导一下看看。广义的
原核表达
,是指发生在原核生物内的基因表达。狭义的原核表达,常出现于生物工程中。是指通过基因克隆技术,将外源目的基因,通过构建表达载体并导入表达菌株的方法,使...
为什么真核基因在
原核
细胞中
表达
出来
的蛋白质
常常失去活性
答:
变性
的蛋白质
,之所以失去生物学活性,就是因为空间结构遭到破坏.2.蛋白质在内质网上的核糖体合成后,都有一个翻译后加工的过程(发生在内质网腔、高尔基体内),才能形成成熟的蛋白质.
原核
细胞
没有
相应的翻译后加工机制(原核细胞内没有内质网、高尔基体),所以无法产生有生物学活性的蛋白质.
为什么有些在
原核
细胞中
表达
的真核
蛋白没有
生物活性
答:
原核
生物
没有
真核加工目的蛋白的酶(切去内含肽,信号肽)或分子伴侣,及修饰(如糖基化)等,
蛋白质
必须有正确构象才有活性,原核生物只是
表达
出前体。
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