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原核表达蛋白偏小
蛋白偏小
是什么原因
答:
有可能是你的操作有问题
。还有就是实验都有误差,看你这个是不是在误差范围内。你的设备器材上的问题考虑过没有?
原核表达
分子量特别小,跑胶是不是看不到啊
答:
一般如果要表达的DNA片段太小看不到的话基本上是做双酶切鉴定的时候会出现
,因为片段太小会导致从载体上切下了的片段总的质量太小而染色看不清,这时只要增加原始酶切的质粒的量就OK了。如果是蛋白的话,这个和分子量大小其实没多大关系,一般分子量小的话,你需要根据你的蛋白预测大小来调整PAGE胶的...
利用
原核表达
的
蛋白表达
量怎么越来越低了?
答:
如果楼主你的实验设计没任何问题,并且你的实验步骤也很严谨的,但是你就是找不出原因来的哈耶正常哈!生物实验有时很诡异的!~楼主你也不要着急哈,你换个人或者换个环境再做做看看,所不定就行了!~~~楼主好运!!!~~~
做
蛋白
在真核细胞的
表达
,但是表达量很低,怎么解决
答:
用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化的
蛋白
性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。有的时候在不同的表达体系里面对蛋白的表达量是有影响的。当构建完成后携带有信号肽的时候,一些蛋白在真核表达体系中表达量极低。去除信号肽序列...
原核
生物中
表达
真核
蛋白
应该注意什么问题
答:
分析其密码子,由于原核与真核生物的密码子偏好性不同,所以有时可能会出现稀有密码子而影响表达的情况;要注意你要
表达蛋白
的大小问题,一般情况下大于70KD的蛋白在原核菌种不容易表达或表大量低;
原核表达
出来的一般是包涵体,所以蛋白的复性很关键,否则表达出来了也不能用,没有活性。
这个
蛋白
如何
表达
?
答:
首先你的
蛋白偏小
,不容易表达,而且如果你的SDS-PAGE浓度以及电泳时间掌握不好即使表达了也可能看不到。第二,不是什么蛋白都能
原核表达
,比如跨膜蛋白经常无法表达,看看你的蛋白又没有跨膜区。或者也有可能蛋白不稳定,很容易降解。总之,
蛋白表达
没有通用的好方法,只有不断模索,比如换载体,换条件...
如何提高外源基因片段在
原核
细胞中的
表达
量
答:
在表达过程中,注意摸索诱导剂IPTG的量、诱导时间及培养温度。多次摸索就可以找到一个最佳方案,因为
蛋白表达
是一个载体+宿主菌+培养条件的优化组合的选取。你有可能还要考虑蛋白是否会形成包涵体,用什么样的柱子纯化。本人觉得主要是在诱导和温度培养是影响比较大,多设几组对照看哪一组表达量高。祝你...
若有一
蛋白
经
原核表达
以后有一定毒性且表达量低,应如何解决?
答:
原核表达
还有毒性?那一把它的跟毒性相关的基因修改一下呗
蛋白表达--
原核蛋白表达
答:
甚至引入辅助物质,是降低包涵体形成的关键。同时,
原核表达
问题的解决之道,包括基因改造、翻译起始点调整、载体选择等,都需通过精细的实验和分子生物学手段来攻克。最后,通过高温诱导纯化TB小试,和更换培养基的实验,不断优化,直至找到最适宜的大肠杆菌舞台,让每一种
蛋白
都能在其中完美绽放。
原核表达
第一次大量表达了目的
蛋白
但第二次表达出的目的蛋白就很少了为...
答:
目的
蛋白
的
表达
跟基因本身关系密切,载体,表达条件关系也很大。空载体能表达不代表你的蛋白能在该条件下表达。
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