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得到大量原核表达的X蛋白
如何
得到
基因的
原核表达蛋白
,并通过免疫动物得到特异性抗体
答:
要
得到
基因的
原核表达蛋白
,先要考虑
表达的
载体,pET系列载体是目前应用最为广泛的原核表达系统,已经成功地在大肠杆菌中表达了各种各样的异源蛋白。一般的pET载体是先在不含DE3片段的菌株中进行克隆筛选,之后再把阳性克隆转化进入表达菌株,如BL21 DE3中,通过IPTG诱导进 行表达。通过扩大培养的体积
获得
...
求助:
原核表达
目的
蛋白
胞内发生降解
答:
应该是
原核表达
宿主菌比较准确 原核表达宿主菌之前可以
表达蛋白
,放一段时间不表达蛋白原因很多 首先要确认其他条件是否也有改变,比如其他基因,质粒载体,表达条件等等 原核表达宿主菌保存条件没有控制好可能导致宿主菌退化,被污染等等,结果。能抑制多长时间你需要自己检测。不同细胞、不同siRNA、不同转染...
请教大肠杆菌中
蛋白表达
后该如何处理
答:
因为做蛋白结构
的蛋白
需要非常高的浓度,至少要10mg/ml以上,这样就需要很大的蛋白量。而目前的表达系统中,只有
原核表达
系统也就是大肠杆菌
大量表达蛋白
时成本最低。所以一般做蛋白结构的都用大肠杆菌来表达蛋白。
原核表达
时跑完电泳,条带应该是多大,是和自己的目的基因
蛋白
的分子量一...
答:
原核表达的蛋白
是没有修饰作用的,一般而言电泳表观分子量应该与蛋白分子量+标签的大小一致。但有时候会有一定的迁移,比如用pet28a表达的蛋白进行电泳时表观分子量会比蛋白分子量+标签大5kD左右。不过通过对比未诱导的阴性对照能很清楚地看出来自己表达的蛋白。
蛋白原核表达
需要切掉前体吗
答:
你是想切掉表达出来的融合
蛋白
的His,还是想在载体上就把标签去掉啊!想切掉His可以说不可能,pET载体上就没有提供可用的蛋白酶切位点,而且6个His也不大,应该没事吧.想切标签的话就换GST的吧,那个都是在纯化后切下去的.要是切载体的话就没法纯化了.His-tagged真的没法切!我们
表达的
十几kD的小蛋白...
这个
蛋白
如何
表达
?
答:
首先你的蛋白偏小,不容易表达,而且如果你的SDS-PAGE浓度以及电泳时间掌握不好即使表达了也可能看不到。第二,不是什么蛋白都能
原核表达
,比如跨膜蛋白经常无法表达,看看你
的蛋白
又没有跨膜区。或者也有可能蛋白不稳定,很容易降解。总之,
蛋白表达
没有通用的好方法,只有不断模索,比如换载体,换条件...
蛋白的表达
与纯化
答:
2 构建表达载体:根据你
获得的
基因本身的特性确定原核或者真核载体中表达,这一步的主要问题就是构建带有目的基因的质粒,导入表达系统中。一般
原核表达
时间短,成本低,表达量大,常优先考虑;但是有些基因在E coli中就是表达不出,可能是密码子优化等出现问题,也或者是由于想纯化
得到
更好的活性
蛋白
的...
原核表达
在16度应诱导多长时间
答:
低温诱导一般需要的时间都比较长,一般如果能够诱导出来的话大概是24小时。如果是PET系统的话,有些
蛋白
是16度诱导不出来的,你得自己重新摸一下诱导的温度。
为什么要让真核生物的基因在
原核
生物中
表达
并纯化
蛋白
呢?
答:
实际上真核生物的蛋白也可以用真核细胞
蛋白表达
系统来实现,而且效果往往更好。用原核生物来表达主要还是因为操作简单,快速。如果希望表达和纯化
的蛋白
性质稳定,经原核系统表达之后仍然有正确的折叠构象,那么使用
原核表达
系统就很合适了。
真核
原核表达
系统的优缺点?
答:
在各种表达系统中,最早被采用进行研究的是
原核表达
系统,这也是目前掌握最为成熟的表达系统。该项技术的主要方法是将已克隆入目的基因DNA片段的载体(一般为质粒)转化细菌(通常选用的是大肠杆菌),通过IPTG诱导并最终纯化
获得
所需的目的
蛋白
。其优点在于能够在较短时间内获得基因表达产物,而且所需的成本相对比较低廉。但与...
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