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纯化后蛋白析出
纯化
回收的上清
蛋白析出
还有活性吗用
答:
首先要确认
析出
的
蛋白
是否可以复溶,如果不能复溶就肯定不会有活性。如果可以复溶,那么还是具有有活性的可能。然后,析出的原因也较多,如果是因为盐浓度较高导致的析出,重新复溶后具有活性的可能性较大,如果是因为pH原因造成的沉淀析出,即使能够复溶有活性的可能性也比较小了。另外如果是镍柱回收的...
蛋白析出
问题
答:
看起来是构象不正确,可能是折叠或修饰的问题。如果只要求可溶,
纯化后
稀释一下,也许就不沉淀了。也可以试试加一些稳定剂,如甘油,DTT,分子伴侣等。如果要正确折叠的,就比较麻烦,可以用真核表达系统试试。Thermo有一种用人细胞裂解液表达的系统,自称修饰系统很好。
蛋白纯化后
为什么要结晶呢?结晶目的是什么
答:
一个原因是分离,
蛋白
质的纯化与分离是离不开的,不分离怎么利用,而结晶其实也是分离的一个手段一部分。第二个原因,低温结晶后蛋白质相对会稳定一点,酸碱高温都会破坏蛋白质,所以结晶后也便于保存
以后
再用。希望对你有所帮助
在进行凝血酶
纯化
时
蛋白
总是
析出
来,不知如何解决,过程如下:猪血将...
答:
在提纯时整个过程是在缓冲液中进行的吗?
纯化蛋白
时选择合适的缓冲体系,包括盐浓度、pH值,不宜突然变换洗脱条件,注意控制好洗脱温度等
如何使用
纯化
标签获得在大肠杆菌中的表达的
蛋白
答:
根据不同的
纯化
标签对应的亲和层析色谱可以分离出表达的目的
蛋白
亲和色谱是将与某一组蛋白对应的特异性配基结合到色谱基质上,蛋白质因为有纯化标签可以与其特异性的配基结合,并且这种结合是可逆的。这样可以很轻松提取分离出表达的目的蛋白。下图是一些可以特异性结合的配基 ...
蛋白质纯化蛋白质纯化
有机溶剂提取
答:
例如,冰核蛋白的
纯化
可以通过在冰浴中磁力搅拌,缓慢加入预冷的乙醇(-25℃)来实现,这有助于
蛋白质
的
析出
。然而,由于有机溶剂在室温下可能导致蛋白质变性,因此通常需要将它们冷却后再加入,以保持搅拌,避免局部浓度过高和蛋白质结构受损。对于那些与脂质紧密结合或含有较多极性侧链、不溶于水的蛋白质...
蛋白质纯化
的药物分离
答:
一、根据
蛋白质
溶解度不同的分离1、蛋白质的盐析法:中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响,一般在低盐浓度下随着盐浓度升高,蛋白质的溶解度增加,此称盐溶;当盐浓度继续升高时,蛋白质的溶解度不同程度下降并先后
析出
,这种现象称盐析。2、等电点沉淀法:蛋白质在静电状态时颗粒之间的静电斥力最小,...
蛋白纯化
答:
二、
蛋白纯化
的详细过程 1. 样品预处理:这是纯化的第一步,可能涉及细胞破碎、组织研磨等,以释放
蛋白质
。2.蛋白质的溶解:在这一步中,蛋白质被溶解在适当的缓冲液中,以便于后续的分离。3.分离:这一步是关键,通常使用色谱技术来分离蛋白质。4.纯化:经过一系列的分离步骤后,特定的蛋白质被...
纯化后
的
蛋白
做western,出现很明显的两条带,请问是二聚体吗
答:
煮沸时间不够使得
蛋白质
变性不充分或者形成二聚体会导致实验效果不好,煮过头的情况我也没有遇到过(貌似还没有碰到人煮个5-10分钟还会煮成一小时的- -|||),不过肯定的是变性已经充分.可以试一试,当然也有可能蛋白质长时间高温沸水作用下部分降解.
上清
纯化
的
蛋白
要加到细胞中的,pbs透析会
析出
,可以用什么透析液_百度知 ...
答:
可以考虑hepes缓冲溶液。推荐多看一些文献,参考一下。
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