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纯化后蛋白还有标签吗
带HIS
蛋白
用镍柱
纯化后
的保存问题
答:
你好,
蛋白
保存是个比较棘手的问题,就我的理解来讲:蛋白的保存很大程度上依赖于蛋白本身的结构稳定性,其次和保存条件优化有关;尽量避免蛋白的反复冻融,这会对蛋白的结构和活性造成破坏;像你说到的第二天就要用,根本没必要放在-70℃低温,一般来讲,尽量安排好实验周期,在3天内用完蛋白(4℃...
纯化蛋白
破碎后的状态
答:
通常情况下,当
蛋白质
被破碎时,其状态或形状会发生变化,而且可能会失去其特定功能或活性。此外,在一些情况下,来自不同蛋白质的碎片可以被重新组合以形成新的蛋白质机器或结构。 最终的结果取决于所用的破碎方法和
纯化后
的处理过程。
蛋白质纯化
相关问题
答:
这个要看具体情况。如果直接层析,盐会进入凝胶内部,出来最晚。如果你要的
蛋白
是分子量较大,出来早的,影响就不大;如果你要小分子量的,就和盐分不开,就要先除盐。不过,盐析时加的盐很多,如果样品体积大,这么多盐会对层析造成干扰,所以一般都会先除盐。
镍柱
纯化蛋白
,为什么把所有流出液电泳,都没有看到蛋白条带啊?加入前...
答:
电泳检查你的流穿液,对比上样前的样品,确信
蛋白
石结合到柱上 你his-tag的包涵体蛋白,用尿素洗脱,其pH值是多少?需要用低pH;如果pH不够,极可能你的蛋白还在柱上。此外,你有没尝试过柱上复性,以避免用尿素洗脱?
为什么
蛋白
纯不出来?
答:
离子交换用在破碎液
纯化
时效果不是很好的 最好是先做粗纯化,比如分级盐析沉淀一下 然后用疏水层析 浓缩样品再用离子交换精细纯化
还有
一种就是试着在构建阶段给
蛋白
加一段tag,比如组氨酸的
标签
这样可以用亲和层析做破碎液纯化效果会好很多
经初步
纯化后
的
蛋白质
样品,如果用层析法检测显示只有一个峰,是否可以认...
答:
切完后再过柱子。如果
还有
原来的峰则证明有杂蛋白存在。第二种方法也类似。离子交换层析的原理是根据
蛋白质
的等电点来
纯化
的。电泳法也是根据分子量来判断。超速离心是根据沉降系数来分离的。这些都没办法彻底排除杂蛋白的影响。要排除得去考虑蛋白质的氨基酸序列。这样才能彻底排除干扰。
纯化
得到的
蛋白
跑电泳上样之前要变性吗
答:
要看是哪种电泳了,如果是SDS-PAGE就一定是需要将
蛋白
变性的,不加SDS的话蛋白是跑不下去的。如果是Native-PAGE就不需要将
纯化
得到的蛋白变性,这种PAGE是依赖分子量大小完成电泳的。
蛋白纯化后
为什么要结晶呢?结晶目的是什么
答:
一个原因是分离,蛋白质的
纯化
与分离是离不开的,不分离怎么利用,而结晶其实也是分离的一个手段一部分。第二个原因,低温结晶
后蛋白
质相对会稳定一点,酸碱高温都会破坏蛋白质,所以结晶后也便于保存以后再用。希望对你有所帮助
表达
纯化蛋白
过程中出现一条条带略小的非目的蛋白,且同样带有组氨酸
标签
...
答:
你是如何知道那条非目的条带也带有组氨酸
标签
的呢?亲和层析和目的条带一起洗下来的吧?可能是组氨酸丰度较高的杂
蛋白
,也可能目的蛋白部分降解。要想获得较高纯度的蛋白仅仅用一步亲和层析很难达到。可能试试再加一步甚至多步层析步骤以期得到高纯度的蛋白。可以选择的层析方法推荐使用反向、离子交换。
蛋白纯化
答:
二、
蛋白纯化
的详细过程 1. 样品预处理:这是纯化的第一步,可能涉及细胞破碎、组织研磨等,以释放
蛋白质
。2.蛋白质的溶解:在这一步中,蛋白质被溶解在适当的缓冲液中,以便于后续的分离。3.分离:这一步是关键,通常使用色谱技术来分离蛋白质。4.纯化:经过一系列的分离步骤后,特定的蛋白质被...
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