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融合表达蛋白没有活性
绿色荧光
蛋白没有活性
答:
绿色荧光蛋白没有活性是因为:
绿色荧光蛋白的基因和我们感兴趣的有机体内所拟研究的蛋白质基因相融合时,蛋白质既能保持其原有的活性
,绿色荧光蛋白的发光能力也不受影响。绿色荧光蛋白(简称GFP),是一个由约238个氨基酸组成的蛋白质,从蓝光到紫外线都能使其激发,发出绿色萤光。
gst
融合蛋白有
目的
蛋白活性
么
答:
融合蛋白有
两种不同的含义,一种是通过DNA重组技术得到的两个基因重组后的
表达
产物。另一种含义就是介导两个细胞质膜融合的一组蛋白,如在仙台病毒脂双层外侧小叶中含有的两种糖蛋白之一,介导病毒被膜与宿主细胞质膜的融合作用。另一种糖蛋白是血细胞凝集素神经酰胺酶。两个不同
的蛋白质
连成一个大分子。
目的基因在大肠杆菌细胞内形成
的蛋白质无
生物
活性
的原因?
答:
目的基因在大肠杆菌细胞内形成
的蛋白质无
生物
活性
。是因为,目的基因取自真核生物细胞,需要内质网,高尔基体等细胞器的进一步加工,而原核细胞不具有这些细胞器。
高中生物内质网形成的囊泡包裹着
的蛋白质有没有
生
活性
?
答:
暂时
没有活性
,因为它还要被送到高尔基体进一步加工,之后形成一定的空间结构,然后这个
蛋白质
发挥作用.
His
融合蛋白
纯化中常见问题?
答:
His-Tag
融合蛋白
是目前最常见的
表达
方式,而且很成熟,它的优点是表达方便而且基本不影响蛋白的
活性
,无论是表达的蛋白是可溶性的或者包涵体都可以用固定金属离子亲和色谱去(IMAC)纯化。2.1 IMAC(Immobilized Metal-ion affinity chromatography)是Porath et al.1975年用固定IDA作为配基的填料螯合过渡金属铜...
蛋白表达
不出来是怎么回事?
答:
更换载体;第四步:更换载体还不表达,选择GST、MBP、SUMO、GB1等助溶标签
融合表达
。另外,当目的
蛋白
太小或太大时可能都不易表达:小肽易被降解;太长例如大的膜蛋白等表达量往往也很难优化。当然,表达温度以及诱导时间也会对蛋白的可溶表达有一定影响~ 但一般不会导致0和1的差别~祝实验顺利~...
融合蛋白表达
法的优缺点是什么?
答:
优点:可以方便检测及分离纯化;缺点:可能影响到原
蛋白
的结构而破坏它天然的功能,或赋予其新的功能.具体的要看你和什么标签
融合
.
蛋白质融合
标签
答:
GST标签
融合蛋白
可直接从细菌裂解液中利用含有还原型谷胱甘肽琼脂糖凝胶的亲和树脂进行纯化,用10mM 还原型谷胱甘肽洗脱,可得到高浓度、高纯度融合蛋白。不过由于GST标签较大,通常需要将该标签切除,因此GST一般融合在靶标的N端。对于目标蛋白为活性酶的情况,如果经过活性验证确认GST对酶的
活性没有
影响,也可以保留标签。
融合蛋白
的融合蛋白简介
答:
其缺点是真核
蛋白表达没有
得到确切修饰;大量
蛋 白
常常沉淀成不溶性包涵体聚合物,需要复杂的变性和复性过程;大量蛋白的分泌较困难。真核表达系统的特点是蛋白翻译后加工机会多,甚至可被改造成人源型;真核细胞易被转染,具有遗传稳定性和可重复性;产物可被分泌,提纯简单,成本低。 构建
融合蛋白
的...
蛋白表达
不出来是怎么回事?
答:
第四步:以上三步
没有
问题时,若还不表达,更换载体;第四步:更换载体还不表达,选择GST、MBP、SUMO、GB1等助溶标签
融合表达
。另外,当目的
蛋白
太小或太大时可能都不易表达:小肽易被降解;太长例如大的膜蛋白等表达量往往也很难优化。当然,表达温度以及诱导时间也会对蛋白的可溶表达有一定影响~ ...
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