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诱导表达蛋白上清和沉淀都有
为什么要对
上清和沉淀都
进行电泳
答:
难溶解。因为有时候难溶解的就是你的目标
蛋白
,所以每次处理都要把
上清和沉淀
跑电泳对比,免得把目标蛋白弄丢了,此外刚处理完的包涵体好溶解。
毕赤酵母
诱导
后SDS电泳
蛋白
在
沉淀
中是为什么
答:
1)你应该是没有明白什么是包涵体,简单的说就是翻译的
蛋白
没有正确折叠而聚集在一起形成的,主要的是疏水作用.实际上就是很多个蛋白分子,这些蛋白并不是交联在一起的,用高浓度的尿素和盐酸胍可以使他们变性,解聚.2)用
沉淀
跑电泳可以确定目的蛋白是否在包涵体?包涵体是不溶于水的,比较总蛋白.沉淀,
及
...
表达
菌不同会造成
蛋白
在
上清与沉淀
的不同吗
答:
我想应该是不同的
表达
菌株有不同的合成酶系以及修饰和转运方式,例如大肠杆菌没有信号肽和分子伴侣,所以很多外源
蛋白
的表达是以包涵体形式出现在
沉淀
里,而酵母菌能够进行糖基化和跨膜运输,就能够外分泌可溶表达。别说是不同的菌株了,就算是同一种菌株在不同温度和
诱导
条件下也可能对同一蛋白出现不同...
求求。。。进行
蛋白质
分离纯化前,小试管预实验法具体步骤???望高手指点...
答:
1,检测
表达蛋白
的可溶性:用新鲜菌种接种5ml或10ml摇菌,先37℃摇,3小时后
诱导
3h(这个温度和时间有文献参考是最好的),收菌体,用pbs洗2遍,再1mlPBS悬浮,破菌(超声,或加溶菌酶,或试剂盒之类的),12000rpm离心20min,分别收集
上清和沉淀
。用1ml的pbs重悬沉淀,加SDS-PAGE的loading buffer...
包涵体纯化
蛋白
复性案例分析——钟鼎生物
答:
IPTG
诱导蛋白表达
,经12% SDS-PAGE分析,目标蛋白主要存在于
沉淀
中,结果如图所示 图1 蛋白表达鉴定SDS-PAGE分析 Fig.1 SDS-PAGE analysis of expression M:
蛋白质
分子质量标准 1: 未诱导 2: 诱导后 3: 诱导破碎后
上清
4: 诱导破碎后沉淀 包涵体蛋白的变复性 1. 将菌体沉淀重悬于20 ml 裂解...
IPTG
诱导表达
后的
蛋白
上样问题
答:
IPTG
诱导
后一般为胞内
表达
。1.检验
蛋白
的表达:取微量菌液,离心收获菌体,然后用PBS 之类重悬,洗涤菌体若干次,加入与菌液等量的PBS,取菌悬液与上样buffer混合,100度3min,取上清上样。对照为未诱导的菌体。2.蛋白的可溶性鉴定:离心取菌体后,用PBS重悬,超声破碎,分离
上清和
残片,上清直接制...
噬菌体侵染细菌的实验。
沉淀和上清
液是什么
答:
1-在同位素标记噬菌体的【
蛋白质
衣壳】侵染细菌的时候 最终得到的放射性物质就在
上清
液中 那是蛋白质 2-在同位素标记噬菌体的【DNA】侵染细菌的时候 最终得到的放射性物质就在
沉淀
中 那就是DNA 这是最原始的 赫尔系和才思的实验图 左边标记的就是蛋白质 也就是出现在上清液中 右图标记的就是dna...
半乳糖
诱导
酵母
表达
需要多久
答:
2天后能够看到大量很明显的转化子(用加水的BY4741感受态做对照不长)。但是用半乳糖
诱导
,破菌后SDSPAGE跑
上清沉淀
,看不到目的
蛋白
,空载体和质粒跑得SDSPAGE差不多结果。在酵母细胞中信息素信号通路和细胞壁完整性通路是两条重要的MAP激酶信号通路,它们之间具有很重要的交互作用。
蛋白
原核
表达
答:
共计10min,可五分钟观察一次,如果体系过大,则超声时间时间延长。8.将裂解后的细胞,转到2mL离心管(共五管),如体系大,则转到圆底离心管便于离心。4℃ 12000rpm 15min。9.取
上清和沉淀
各40μL,上清(SP)和沉淀(CP)。10.加入loading(一共10μL)和Marker(3μL)11.考染观察结果。
提取细胞
蛋白质
:细胞加入裂解液后离心,是取
上清
液还是取
沉淀
物,上清 ...
答:
取
上清
液,上清液中主要含有
蛋白质
、糖类、核酸等;
沉淀
主要是一些细胞碎片,包括一些细胞器等等。
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